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钙结合蛋白39文献资料
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微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应
目的 探讨微小RNA-451(micro RNA-451,miRNA-451)靶向调节钙结合蛋白39(calcium binding protein 39,CAB39)表达,促进MSCs向成骨细胞分化的效应. 方法 选择pMIR-report质粒及pRL-TK质粒,通过双荧光素酶基因报告系统,鉴定CAB39是否为miRNA-451的靶基因.将pre-miRNA-451(A组)及anti-miRNA-451(C组)分别转染到C3H10T1/2细胞中,同时设置相应的pre-miRNA阴性对照组(B组)和anti-miRNA阴性对照组(D组)；成骨诱导培养7、14 d,采用实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP mRNA相对表达量;诱导培养14 d,采用Western blot检测细胞中CAB39蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况. 结果 经鉴定,CAB39是miRNA-451的靶基因.实时荧光定量PCR检测示,成骨诱导培养7、14d,A组Runx2、ALP mRNA相对表达量显著高于B组,C组显著低于D组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05).成骨诱导培养14d,Western blot检测示A组CAB39蛋白表达量为0.55士0.05,较B组1.00±0.07明显降低；而C组为1.21士0.05,较D组1.00±0.04明显增高；差异均有统计学意义(P＜ 0.05).茜素红染色示A组细胞外钙基质沉积较B组明显增多,而C组细胞外钙基质沉积较D组明显减少. 结论 miRNA-451可通过抑制CAB39表达,促进MSCs成骨分化.
