首页 > 文献资料
-
新型一体化纤维环-髓核双相支架的制备与评估
目的 用脱细胞脱钙骨基质和脱细胞髓核基质构建新型一体化纤维环-髓核双相支架,并进行理化检测,探讨其作为组织工程椎间盘支架的可行性. 方法 取猪股骨近端松质骨,塑形成外径10 mm、内径5 mm、厚3 mm的骨环,经脱脂、脱钙、脱细胞处理制备成纤维环相支架；取猪尾髓核组织,Triton X-100和脱氧胆酸联合脱细胞后粉碎、离心,制备脱细胞髓核基质；将制备的脱细胞髓核基质注入纤维环相支架中央,冷冻干燥,联合应用紫外照射和碳化二亚胺进行交联,制备一体化纤维环-髓核双相支架.通过大体观察、HE染色、扫描电镜观察支架结构；测定支架的孔隙率、吸水率、压缩弹性模量；MTT法检测25％、50％、100％支架浸提液对新西兰大白兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖的影响；将ADSCs接种到支架上,活/死细胞染色观察细胞在支架上的活性. 结果 大体观察支架呈乳白色；HE染色可见支架均质红染,无细胞成分残留；扫描电镜可见外层纤维环相支架孔径大小均匀一致,孔隙相互贯通,中央脱细胞髓核基质微丝相互连接,形成均匀网状结构,交界处连接紧密.纤维环相支架孔径为(343.00±88.25)μm,一体化纤维环-髓核双相支架孔隙率为82.98％±7.02％、吸水率为621.53％±53.31％,压缩弹性模量为(89.07±8.73)kPa.经MTT测定支架浸提液对ADSCs增殖无影响；活/死细胞染色可见细胞在支架上生长良好,无死细胞. 结论 用脱细胞脱钙骨基质和脱细胞髓核基质构建的一体化纤维环-髓核双相支架具有合适的孔径和孔隙率且无毒,力学性能与人正常椎间盘接近,是构建组织工程椎间盘的理想支架载体.
-
组织工程椎间盘的构建及体外观察
目的 探讨构建组织工程椎间盘的可行性,修复退变椎间盘.方法 应用热致分相法制备聚乳酸-羟基乙酸三维多孔支架,酶消化法体外分离培养20周龄意外流产胎儿椎间盘细胞,PKH-26荧光标记后接种于支架,体外培养48 h,通过MTT摄取、激光共聚焦荧光显微镜及扫描电镜方法进行体外观察.结果 原代细胞形态多为卵圆形或三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出多个长短不同的突起.多孔支架超微结构显示孔隙由中心向外呈放射状分布,形态、取向规则有序,孔隙直径50～300 μm.细胞-支架复合体加入MTT溶液2 h后呈深蓝着色,激光共聚焦荧光显微观察可见大量红色荧光着色的细胞贴附于支架结构内.结论 应用组织工程技术构建的细胞-支架复合体具备理想的三维微观结构及具有生命力的功能细胞,有可能在椎间盘再生研究中发挥重要作用.
关键词： 组织工程椎间盘 细胞培养 聚乳酸-羟基乙酸支架 体外观察
