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bFGF-PLGA缓释微球生物活性组织工程神经的构建和效果评价研究
目的 探讨应用SC、ECM凝胶、bFGF-PLGA缓释微球、PLGA纤维微丝整合至高渗透性聚乳酸[poly(D,L-lacitic acid),PDLLA]导管中,构建组织工程神经的方法,并评价其修复周围神经缺损的效果.方法 培养和纯化1 d龄SD近交系乳鼠SC,取第1代细胞(1 x 107个/mL)与bFGF-PLGA缓释微球、ECM凝胶复合,注入内置PLGA纤维微丝的高渗透性PLLDA导管中,构建组织工程神经.取成年SD大鼠60只,制备坐骨神经15 mm缺损模型后,根据移植物不同随机分为5组(n=12).A组:采用自体神经移植修复;B组:PDLLA导管,管内注满PBS液;C组:含PLGA纤维微丝的PDLLA导管,管内注满30%ECM凝胶;D组:含PLGA纤维微丝的PDLLA导管,管内注满30%ECM凝胶与SC的混合物;E组:组织工程神经.术后观察大鼠一般情况,于术后12、16、20及24周行坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)测定,术后12及24周神经电生理检测,并取材行大体观察和组织学观察.结果 术后大鼠均存活至实验完成.术后12、16周,E组SFI与B组差异有统计学意义(P＜0.05);术后20、24周,E组与B、C组差异有统计学意义(P＜0.05).术后12周,电生理检测E组坐骨神经传导速度(nerve conduct velocity,NCV)大于B、C组(P＜0.05),复合动作电位振幅(compound amplitude,AMP)和动作电位面积分数(action potential area,AREA)大于B、C及D组(P＜0.05):术后24周,E组NCV、AMP和AREA大于B、C组(P＜0.05).组织学观察术后12周,E组再生神经组织面积及有髓神经纤维数与A、B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);有髓神经纤维密度和直径小于A组(P＜0.05),大于B、C、D组(P＜0.05).术后24周,E组再生神经组织面积大于B组(P＜0.05),有髓神经纤维数与A、B、C组比较有统计学意义(P＜0.05);有髓神经纤维密度和直径大于B、C组(P＜0.05).结论 SC、ECM凝胶、bFGF-PLGA缓释微球、PLGA纤维微丝与高渗透性PDLLA导管相互整合构建的组织工程神经修复神经缺损后,能促近神经再生,修复效果接近于自体神经移植.
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碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层细胞粘附活性的影响
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微球对许旺细胞(SC)在小肠粘膜下层(SIS)上的粘附影响.方法 运用双酶两步消化法对SC进行体外分离、培养、纯化,将bFGF-PLGA缓释微球(bFGF-PLGA-MS)与SC及SIS进行体外复合培养,并以游离bFGF组及单纯培养液组进行对比,观察bFGF-PLGA缓释微球对SC在SIS上粘附影响.结果 运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的雪旺细胞数量较多,细胞纯度可达90％以上.细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7天,培养后2～7天为对数生长期,第7天后进入生长平台期; bFGF缓释微球能持续地促进雪旺细胞在SIS上的粘附、增殖及迁移;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性；提高了细胞增殖指数,并使SIS上的SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与bFGF含量的相关系数为0.988(P=0.02),表明两者间有明显正相关关系.结论 bFGF-PLGA微球的药物缓释促进了SC在SIS上持续而稳定的粘附,为以SC复合SIS构建人工神经提供了有利条件.
