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阿克苷对大鼠视网膜神经节细胞保护作用及其安全性研究
目的 观察大鼠玻璃体腔注射阿克苷的安全性及其对视网膜神经节细胞(RGC)保护作用.方法 190～210 g清洁级健康雌性Sprague Dawley大鼠50只纳入研究.其中,15只大鼠用于阿克苷玻璃体腔注射安全性研究.随机分为实验1、2、3组、对照组和空白对照组,每组3只大鼠.其中,实验1、2、3组分别玻璃体腔注射1、2、5 mg/ml的阿克苷溶液5μl;对照组玻璃体腔注射磷酸盐缓冲溶液(PBS)5 μl;空白对照组不施加任何干预.1、2、3周后摘除眼球行冷冻切片,苏木精-伊红(HE)染色光学显微镜观察视网膜结构,1、3周行超薄切片透射电子显微镜观察视网膜超微结构.其余大鼠用于阿克苷对RGC保护作用研究.随机分为手术A、B组,假手术C、D组和空白对照组.其中,手术组及假手术组各组均为8只大鼠,空白对照组3只大鼠,共35只.手术组大鼠在暴露视神经后夹持视神经10s,假手术组大鼠仅暴露视神经.手术A、B组分别经玻璃体腔注射1 mg/ml阿克苷5μl、PBS液5μl;假手术C、D组分别经玻璃体腔注射1 mg/ml阿克苷5 μl、PBS液5μl;空白对照组不施加任何干预.1、2、4周后摘除眼球行冷冻切片,部分切片HE染色后光学显微镜观察视网膜结构,计数RGC;部分切片行免疫组织化学二步法检测生长相关蛋白43(GAP 43)表达,原位切口末端标记(TUNEL)法检测RGC凋亡情况,计数RGC及阳性细胞数,计算细胞凋亡率.采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析.结果 阿克苷玻璃体腔安全性评价研究中,玻璃体腔注射后,大鼠角膜、前房、晶状体、玻璃体腔及视网膜均未见异常.光学显微镜观察显示,第1、2、3周时视网膜各层结构排列整齐,未见明显细胞凋亡、坏死特征及炎性细胞浸润;RGC轻度水肿.透射电子显微镜观察显示,5、2 mg/ml阿克苷玻璃体腔注射后大鼠视网膜微结构发生明显改变,1 mg/ml阿克苷注射后大鼠视网膜微结构轻微变化.阿克苷对RGC保护作用研究中,光学显微镜观察显示,手术组大鼠视网膜可见典型细胞凋亡表现,假手术组和空白对照组大鼠视网膜均未见明显改变.玻璃体腔注射后1周,手术组RGC数较假手术组和空白对照组少,第2周继续减少,手术A组RGC数多于手术B组,差异有统计学意义(F=26.206,P＜0.05).第4周手术组RGC继续减少,与第1、2周时手术组RGC数比较,差异有统计学意义(F=17.364,P＜0.05),各时间点假手术组间和假手术组与空白对照组间RGC数比较,差异无统计学意义.GAP-43检测结果显示,玻璃体腔注射后1周,手术组大鼠视网膜积分吸光度(IA)值明显高于其他组,差异有统计学意义(F=33.466,P＜0.05);手术A、B组间IA值比较,差异无统计学意义.玻璃体腔注射后2周,手术组大鼠视网膜IA值略下降,且高于其他组;手术A组IA值高于手术B组,差异有统计学意义(F=14.391,P＜0.05).玻璃体腔注射后4周,手术组大鼠视网膜IA值进一步下降;手术A组与其他组IA值比较,差异有统计学意义(F=4.178,P＜0.05).TUNEL检测结果显示,玻璃体腔注射后1周,手术组大鼠RGC凋亡明显增加,与其他组比较,细胞凋亡率差异有统计学意义(F=15.365,P＜0.05).玻璃体腔注射后2周,手术组RGC凋亡率均降低,手术A组大鼠细胞凋亡率低于手术B组,差异有统计学意义(F=12.767,P＜0.05).玻璃体腔注射后4周,手术组大鼠细胞凋亡率明显下降,与其他组比较,差异无统计学意义(F=2.057,P＞0.05).假手术组和空白对照组细胞凋亡率在各时间点、各组间比较,差异无统计学意义.结论 阿克苷玻璃体腔注射具有可行性;1 mg/ml阿克苷对大鼠视网膜影响小,为其安全剂量.玻璃体腔注射阿克苷可增加GAP-43表达,对视神经钳夹伤大鼠RGC凋亡具有一定抑制作用.
