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Vigilin在多种细胞系以及人原发性肝细胞肝癌中的表达研究
目的 探讨Vigilin基因在肿瘤细胞系、正常细胞系以及人原发性肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝癌发生的关系.方法 提取肝癌细胞系、宫颈癌细胞系和正常细胞系总蛋白,采用免疫印迹方法 对Vigilin的表达进行半定量检测.收集59例人原发性肝细胞肝癌标本,进行Vigilin的免疫组织化学染色.结果 Vigilin在所检测的细胞系中,除外周血淋巴细胞外的细胞系均有表达,其中肝癌细胞系中Vigilin的表达均强于正常细胞系(P＜0.05).肝癌组织、癌旁组织和远癌组织中大部分细胞均表达Vigilin,其表达量分别为0.2226±0.054、0.2060±0.056和0.1820±0.038(P＜0.001).肿瘤组织Vigilin高表达的比例为54%,而癌旁和远癌组织高表达的比例分别为32%和6%.Vigilin在肿瘤组织中的表达状态和临床参数间均无明显关系.结论 Vigilin高表达与细胞增殖有关,其可能参与人原发性肝细胞肝癌的发生或发展.
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pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体的构建及vigilin重组慢病毒包装
目的 构建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重组载体,以及包装pCS-CG-DsRed2-vigilin重组慢病毒.方法 用NheⅠ、NotⅠ将目的片段红色荧光蛋白基因DsRed2从pDsRed2-N1中切下,连入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1从pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中.用相应的内切酶鉴定,阳性克隆送测序鉴定.采用三质粒系统包装慢病毒并分别感染HEK293T和HepG2细胞.结果 电泳显示,构建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分别单酶切切下800bp和600bp的插入片段,阳性克隆质粒测序结果与pDsRed2-N1中DsRed2序列一致;HEK293T和HepG2细胞感染后均能观察到较强的红色荧光.结论 带有红色荧光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体构建成功;成功包装出带红色荧光标签的vigilin重组慢病毒,且该病毒具有较高的感染效率.
关键词： Vigilin DsRed2荧光蛋白 重组载体 重组慢病毒
