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神经短肽NAP对体外培养的兔视网膜神经细胞的作用
目的 以感染神经营养因子4-神经保护短肽融合基因(NT4-NAP)的兔虹膜色素上皮细胞(IPECs)为替代分泌细胞,探讨NAP对兔视网膜神经上皮细胞生长的作用.方法 分别培养兔IPECs和视网膜神经上皮细胞;构建NT4-NAP融合基因,同时构建重组腺相关病毒载体rAAV-GFP和rAAV-NAP(含融合基因NT4-NAP),采用斑点杂交法测定病毒滴度.rAAV-GFP感染体外培养的兔IPECs,以荧光表达检测病毒的感染情况.rAAV-NAP感染兔IPECs 3d后收集含NAP蛋白的上清液,将其加入兔视网膜神经上皮细胞的培养基中,观察细胞的生长状况,同时以未加上清液的兔视网膜神经上皮细胞为对照.结果 经斑点杂交证实rAAV-GFP滴度为2.25×1011 cfu/mL,rAAV-NAP滴度为2.25×1010 cfu/mL.感染rAAV-GFP的兔IPECs表达出明显的绿色荧光.在加入含有NAP蛋白上清液的培养基中,兔视网膜神经上皮细胞生长良好,存活细胞数目多,细胞突起粗而长,培养14d时其突起长度[(14.6±1.1) μm]与对照组[(3.1±0.6) μm]相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 神经短肽NAP对体外培养的兔视网膜神经上皮细胞有促进生长的作用.
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神经短肽NAP在缺氧环境中对体外小鼠Müller细胞的保护作用
目的:观察神经短肽NAP对小鼠Mtiller细胞在缺氧环境中的保护作用.方法:用重组腺相关病毒作为载体,将含NT4-NAP融合基因的rAAV-NAP和含报告基因的rAAV-GFP对体外培养的小鼠Müller细胞进行感染,用MTT法和流式细胞仪检测感染细胞和未感染细胞在缺氧24h时的增殖活性和凋亡率.结果:感染rAAV-GFP的小鼠Müller细胞表达出明显的绿色荧光,缺氧24h时,感染rAAV-NAP的细胞与未感染细胞相比,增殖活性高(A=0.109,P<0.05).两组细胞凋亡率分别为8.13%和18.72%,感染有NAP细胞的凋亡率显著低于正常细胞(P<0.05).结论:神经短肽NAP可以减轻缺氧对Müller的损害.
