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活病毒文献资料
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EMA-PCR技术快速鉴别死活腺病毒的初探
目的 探讨采用叠氮溴化乙锭(EMA)联合聚合酶链反应(PCR)快速鉴别死活腺病毒的方法.方法 将不同稀释度的病毒接种至生长良好的单层细胞上,通过细胞病变效应(CPE)的发生情况计算病毒滴度;将3种腺病毒和新城疫鸡瘟病毒分别制备成106 PFU/mL的母液并梯度稀释备用,提取DNA后用PCR扩增后进行凝胶电泳,观察目的片段的扩增结果;分别用0 μg/mL、70 μg/mL、120 μg/mL和150 μg/mL的EMA处理灭活后的腺病毒,提取DNA进行PCR,观察目的片段的电泳结果;用120μg/mL的EMA处理107 PFU/mL、106 PFU/mL、105PFU/mL、104 PFU/mL、103PFU/mL的腺病毒,观察PCR和凝胶电泳结果.结果 104 PFU/mL及以上滴度的病毒DNA PCR后得到阳性条带,其他滴度的病毒DNA PCR后未检测到阳性条带;3个型别的腺病毒(共8个分离株)的DNA均扩增出目的条带,新城疫鸡瘟病毒的DNA未扩增出目的条带;120 μg/mL及150 μg/mL的EMA抑制灭活腺病毒DNA扩增,未得到阳性条带;120μg/mL EMA不影响107 PFU/mL、106 PFU/mL、105 PFU/mL的腺病毒活病毒DNA扩增,得到阳性条带.结论 本研究证实EMA-PCR方法可快速鉴别死活腺病毒,能有效避免单纯PCR检测腺病毒产生的假阳性结果.
