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LIM矿化蛋白-3文献资料
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LIM矿化蛋白-1与LIM矿化蛋白-3共转染骨髓间充质干细胞的基因表达
目的 探讨LIM矿化蛋白(LIM mineralization protein,LMP)-1和LMP-3双基因共转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)的表达情况.方法 采用人工设计合成人LMP-1和LMP-3基因片段,分别与质粒pEGFP-N2连接,经酶切、测序鉴定后.分离培养新西兰兔BMSC,用脂质体包裹转染BMSC,按转染情况分为5组:未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染LMP-1基因组(C组)、转染LMP-3基因组(D组)、LMP-1与LMP-3双基因共转染组(E组).采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测LMP-1和LMP-3的表达.结果 酶切及测序表明真核表达质粒pEGFP-N2-LMP-1和pEGFP-N2-LMP-3构建成功.E组可同时较高水平表达LMP-1和LMP-3分子.对RT-PCR及蛋白质印迹法检测结果行灰度值测量并行统计学分析显示:LMP-1 mRNA及蛋白水平的表达,5组间差异有统计学意义(P＜0.05),但E组与C组的差异无统计学意义(P＞0.05)；LMP-3 mRNA及蛋白水平的表达,5组间差异有统计学意义(P＜0.05),且E组与D组差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 双基因共转染的BMSC能在体外同时表达LMP-1与LMP-3,为基因修复骨缺损带来新思路.
