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糖氧剥夺/再灌注抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统
目的 建立L2.3神经干细胞糖氧剥夺/再灌注损伤模型,探讨糖氧剥夺/再灌注是否可以抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统.方法 体外培养的L2.3神经干细胞经历糖氧剥夺(OGD) 6h,再灌注(R) 16h,建立OGD/R模型.分别在OGD前、OGD6h、OGD6h再灌注16h,用western blot方法检测Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达情况.结果 与糖氧剥夺/再灌注前比,糖氧剥夺6h,再灌注16h可下调Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达.结论 糖氧剥夺/再灌注损伤可抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统
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Huwe1-shRNA靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达
目的 探讨Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,是否可以靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1基因.方法 将体外培养的L2.3神经干细胞分成3组:huwe1-shRNA未转染组(control组)、阴性序列转染组(control shRNA组)、huwe1-shRNA转染组(Huwe1 shRNA组).Control组:仅常规体外培养L2.3神经干细胞.不将阴性序列和Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞.Control shRNA组:阴性序列通过慢病毒转染体外培养的L2.3神经干细胞.Huwe1 shRNA组:Huwe1-shRNA通过慢病毒载体成功感染体外培养L2.3神经干细胞.分别收集三组体外培养的L2.3神经干细胞,应用western blot方法分别检测三组L2.3神经干细胞Huwe1蛋白的表达.结果 与control组、control shRNA组比,Huwe1shRNA组体外培养的L2.3神经干细胞huwe1蛋白表达条带显著减弱、变细(P＜0.05).与control组Huwe1蛋白的相对表达量比,Huwe1shRNA组Huwe1蛋白的相对表达量是control组的25％(P＜0.05).与control组比,control shRNA组和Huwe1shRNA组在慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,L2.3神经干细胞存活率无明显下降(P＞0.05) 结论 Huwe1 shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,可以靶向沉默L2.3神经干细胞Huwe1基因,却不影响L2.3神经干细胞的存活率.
