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miR-217通过靶向14-3-3v抑制胃癌转移的作用及机制研究
目的 探讨miRNA-217 (miR-217)抑制胃癌细胞转移的作用及其机制.方法 qRT-PCR法比较胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞系和正常胃上皮细胞中miR-217的表达差异.转染miR-217 mimics或Inhibitors后,通过Transwell侵袭实验观察miR-217的胃癌细胞转移能力的影响;建立裸鼠尾静脉转移模型,观察稳定表达miR-217在体内对胃癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-217的候选靶基因为14-3-3v,荧光素酶报告基因实验检测SGC7901细胞中miR-217过表达对野生型和突变型14-3-3v荧光素酶活性的影响.Western blot检测miR-217对14-3-3v野生型和突变体蛋白表达的影响.结果 miR-217在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P＜0.01);在各胃癌细胞中的表达量较正常胃上皮细胞GES显著降低(P＜0.01).miR-217 mimics抑制SGC7901细胞的侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).而miR-217 inhibitors明显促进SGC7901细胞的侵袭能力(P＜0.01);体内实验发现稳定过表达miR-217的SGC7901细胞转移能力明显降低.荧光素酶报告基因结果证实miR-217能够抑制14-3-3v的3'-UTR区荧光素酶活性;Western blot结果显示转染miR-217后,SGC7901细胞中的14-3-3v蛋白水平明显低于对照组;Western blotting结果显示miR-217过表达显著抑制14-3-3v-wt,而不能抑制14-3-3v-mut的蛋白表达.结论 miR-217能够通过靶向14-3-3v抑制胃癌转移,促进miR-217的表达或抑制14-3-3v的表达可能是抑制胃癌转移的有效手段.
