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体外定点诱导突变文献资料
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G156A MGMT体外定点诱导突变及逆转录病毒载体的构建
目的获得含突变位点G156A(第156位点的甘氨酸突变为丙氨酸)的六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase.MGMT),并构建含G156A MGMT(△MGMT)的逆转录病毒载体.方法通过体外定点诱导突变技术产生G156A突变的MGMT,将其克隆入pGEM-T载体,进一步亚克隆至G1Na逆转录病毒载体.结果通过DNA测序分析证实预期位点GGC(甘氨酸)突变为GCC(丙氨酸),经PCR及酶切分析证实成功构建了逆转录病毒载体G1Na△MGMT.结论通过体外定点诱导突变技术成功获得了G156A MGMT,并运用基因重组技术构建了逆转录病毒表达载体G1Na-△MGMT,为进一步将G156A MGMT转导造血干细胞对化疗药物抗性的研究奠定了基础.
