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4T-1细胞文献资料
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下调盘状结构域受体1(DDR1)基因抑制4T-1小鼠乳腺癌细胞的迁移
目的 通过短发夹RNA(shRNA)下调小鼠盘状结构域受体1(DDR1)基因的表达,并观察DDR1下调后对4T-1小鼠乳腺癌细胞迁移的影响.方法 针对鼠的DDR1基因设计并合成2对shRNA干涉序列连入pLKO.1慢病毒表达载体中.测序正确后利用慢病毒包装系统包装表达shRNA的重组病毒,用获得的病毒感染4T-1细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选并建立稳定细胞系.采用实时定量PCR和Western blot法确定DDR1基因的下调效果.利用TranswellTM小室迁移实验观察DDR1下调后的4T-1细胞迁移能力的变化.结果 经测序鉴定后,成功构建了慢病毒pLKO-shDDR1-1、pLKO-shDDR1-2以及阴性对照慢病毒pLKO-shNT.用重组病毒感染4T-1细胞,建立稳定细胞系,实时定量PCR和Western blot法结果表明DDR1基因的明显下调.TranswellTM小室实验显示,与感染pLKO-shNT的对照细胞相比,感染pLKO-shDDR1-1和pLKO-shDDR1-2的细胞迁移能力明显降低.结论 下调DDR1基因的表达可以抑制4T-1乳腺癌细胞的迁移.
