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Syndecan-1高表达载体及不脱落突变体的构建及表达鉴定
目的:建立小鼠syndecan-1的pcDNA3.0高表达和不脱落的真核表达载体并进行表达鉴定.方法:(1)PCR扩增syndecan-1编码序列,构建载体pcDNA3.0-widetype-syndecan-1( WT-sdc1),经定点突变技术构建载体pcDNA3.0-unshedding-syndecan-1( uS-sdc1)；(2)设立阴性对照组、转染组(分别为pcDNA3.0转染组、WT-sdc1转染组及uS-sdc1转染组,转染48 h),予1μmol/L的佛波酯(PMA)刺激15 min后经RT-PCR、Western blot及Dot blot鉴定刺激前后syndecan-1表达的情况.结果:(1)真核表达载体WT-sdc1测序完全正确；载体uS-sdc1目的突变点已成功突变,除了一处无义突变外,其余序列与GenBank中的序列完全一致；(2)转染48 h后,WT-sdc1和uS-sdc1转染组细胞均强表达syndecan-1mRMA和蛋白,细胞上清中仅检测出少量脱落的syndecan-1.PMA刺激后,各组mRMA表达无显著改变；WT-sdc1转染组syndecan-1蛋白表达量较uS-sdc1转染组显著减弱,上清中脱落的syndecan-1含量显著增加.结论:成功构建了WT-sdc1载体和uS-sdc1载体,为深入研究syndecan-1及其脱落在胃肠道疾病中的具体作用及基因治疗奠定了基础.
关键词： Syndecan-1 表达载体 不脱落 突变 胃肠道疾病
