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  • 抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定

    作者:孙杰;戚扬;迟淑萍;由莉越;李瑞生;刘佳;朱雷;程云

    目的:制备抗-HCV高变区I(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定.方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠.采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb.经HAT,HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性:用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数.结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11.该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125x10-5;相对亲和常数为1.0x106 L/mol.该株mAb与HBsAg,HBeAg,HBcAg,HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应.结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1 A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂.

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