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氯氨-T法文献资料
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抗人CD40 mAb 5H6的125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性
目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性.方法:氯氨-T法125I标记mAb 5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留.结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%.(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7 d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%.(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,大结合位点数(Bmasx)=(2.17±0.08)×105个/细胞.(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%.(5)4℃2 h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2 h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%.结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验.
