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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定
目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exosomes.方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes.样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定.结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100 nm.免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45 000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示exosomes膜表面和内部有明显的金颗粒.结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes.
