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人突变体471 TNF-α文献资料
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人重组TNF-α突变体471蛋白的初步纯化及生物学活性
目的: 在利用原核表达系统表达重组人突变体471 TNF-α蛋白的基础上, 对该蛋白进行初步纯化及生物学活性检测.方法: 利用佳发酵和表达条件, 诱导基因重组的人突变体471 TNF-α工程菌表达目的蛋白.收集菌体, 经超声破碎, 分离人突变体471 TNF-α的包涵体, 并观察变性剂及蛋白浓度对蛋白折叠的影响.采用MTT比色法检测并比较人野生型及突变体471 TNF-α的生物学活性.结果: 在适当的变性与复性条件下, 已成功地将突变体471 TNF-α折叠并聚合形成具有生物学活性的三聚体.突变体471 TNF-α对L929的细胞毒活性高于野生型TNF-α的15倍.结论: 原核表达系统中表达的人突变体471 TNF-α经复性处理后具有显著的生物学活性, 为进一步进行动物实验及临床研究奠定了基础.
关键词： 人突变体471 TNF-α 蛋白纯化 MTT比色法 生物学活性
