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pQE30载体文献资料
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重组人TGF-β1在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫原性测定
目的:构建人转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)的原核表达载体,表达、纯化并鉴定该蛋白. 方法: 应用基因重组技术,构建人TGF-β1原核表达载体pQE30-TGF-β1,用SDS-PAGE电泳分析所表达蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白后用Western blot检测,同时用该蛋白免疫BALB/c小鼠,测定免疫血清效价. 结果: 成功构建了人TGF-β1的原核表达载体pQE30-TGF-β1,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在约Mr 14kDa 处出现了一条新生的蛋白条带.经Ni-NTA亲和层析纯化后,Western blot检测显示,重组蛋白6×his-TGF-β1能很好地与抗TGF-β1单克隆抗体特异性结合,并能够诱导BALB/c小鼠产生抗人TGF-β1的中和抗体,免疫血清的效价为1:10000. 结论: 转化生长因子β1是一种多功能细胞因子,在肿瘤的免疫逃避中发挥重要作用.
