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GMFB在高糖处理的Müller细胞中的表达及其对Müller细胞的影响
目的:利用高糖处理Müller细胞,研究高糖条件下胶质细胞成熟因子B(glia maturation factor-β,GMFB)的表达情况和GMFB对Müller细胞的影响,揭示GMFB细胞在糖尿病视网膜病变中可能的作用机制,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的策略.方法:(1)用25mmol/L葡萄糖处理Müller细胞0,1,2,4和6h,采用Western Blot检测GMFB的表达;(2)用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染Müller细胞后,1μg/ml重组蛋白GMFB处理Müller细胞0,2,4,8,12 h,采用Western Blot和免疫荧光检测自噬情况;(3)1 μg/ml GMFB处理Müller细胞24h为实验组,以未处理组作为对照组,进行RNAseq,检测其基因差异表达谱,选取其中表达差异大于1.5倍且P＜0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行基因本体论(gene ontology,GO)分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析.结果:(1)经高糖处理的Müller细胞早期出现GMFB表达上调,以2h处理组的GMFB上调为显著,提示高糖刺激早期能引起Müller细胞的GMFB表达升高;(2)重组蛋白GMFB处理Müller细胞后,Western Blot在第4h检测到自噬被诱导,但很短暂.我们在24 h用免疫荧光检测,没有发现红绿荧光强度变化,提示双标自噬系统检测未检测到自噬发生,可能与不同检测方法的敏感性不同有关.(3)对GMFB处理24 h的Müller细胞抽提总RNA,进行RNAseq检测,显示在被检测的14411个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达的基因有152个.与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有103个,下调的有44个.通过GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关.KEGG分析进一步发现GMFB与细胞黏附分子、轴突导向和胞质DNA感受通路等多条信号通路密切相关.同时,炎症基因IL-33表达降低,提示GMFB有神经保护的作用.结论:GMFB在高糖诱导的Müller细胞中表达明显上调,说明GMFB可能影响细胞间连接,参与炎症反应信号通路等.该工作为理解GMFB在糖尿病视网膜病变中的作用机制提供了有益的线索.GMFB在糖尿病视网膜病变的作用机制需要进一步验证.
