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小鼠脑文献资料
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小鼠脑14-3-3蛋白ζ亚型cDNA克隆及其原核表达分析
14-3-3是一类脑中丰富存在的蛋白质.在许多神经疾病患者的脑脊液中含量升高.近的研究显示该蛋白相关于Parkinson病的病理过程.本研究采用RT-PCR法从小鼠脑中分离出编码14-3-3ζ亚型的cDNA片段,构建了基因重组质粒,分析了14-3-3ζ亚型cDNA在原核细胞中的表达并制备了基因重组蛋白.结果显示,RT-PCR扩增产物为738 bp,编码245个氨基酸.重组质粒在原核细胞中的表达受IPTG诱导呈时间依赖性递增.纯化的目的蛋白在SDS-PAGE 中的表观分子量为32 kD,在Superdex S-200HR中的表观分子量为96 kD.每升菌液可收获目的蛋白4.0 mg.研究结果提示,14-3-3ζ亚型c1NA在原核细胞中高水平表达,基因重组蛋白易纯化可用于制备机体和研究其生理功能.
