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胶质细胞源性神经营养因子 基因克隆 RT-PCR DNA序列分析 胶质瘤 人文献资料
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GDNF在人脑胶质瘤细胞中表达的检测及其cDNA的克隆
为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的cDNA序列,将之用于真核及原核细胞表达.提取我国自建的脑胶质瘤细胞系BT325总RNA,设计两对引物用逆转录PCR法扩增上述两种长度的cDNA片段,然后重组于pGEM-T载体,酶切鉴定插人片段正确后测序.结果表明,脑胶质瘤细胞中只扩增出558 bp的胶质细胞源性神经营养因子全长cDNA片段,未见636 bp片段;且扩增效率较成熟多肽cDNA甚低.提示,该细胞合成的胶质细胞源性神经营养因子可能还存在不含有信号肽而只能在细胞内潴留的成熟多肽形式.作为自泌性生长因子,它可能调节瘤细胞生长等生物学行为;同时克隆到的胶质细胞源性神经营养因子全长及其成熟多肽的cDNA片段,可分别用于真核及原核细胞表达.
