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pPROEX-HTb文献资料
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人NDRG2两亚型基因原核表达载体的构建及表达与纯化
目的 构建两种人NDRG2亚型原核重组体pPROEX-HTb-NDRG2并进行表达、纯化、浓缩和鉴定.方法 根据人NDRG2基因序列设计合成特异引物,聚合酶链反应(PCR)扩增,亚克隆入6×His融合表达载体pPROEX-HTb,在大肠杆菌BL21中经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,并用Protino Ni-TED Resin进行纯化.结果 构建的重组质粒经酶切后分别可见约1100bp大小的片段,与预期结果一致,基因测序结果表明序列正确.在IPTG的诱导下重组体分别表达出分子量约45kD的表达产物,Western blot结果证实重组6×His融合蛋白可与抗-NDRG2蛋白抗体发牛特异性反应;并通过Protino Ni-TED Resin成功获得了纯化蛋白.结论 两种人NDRG2亚型基凶分别被亚克隆至6×His融合表达载体pPROEX-HTb中,并获得成功表达和纯化,为该蛋白的生物活性及抑瘤作用的研究奠定了基础.
关键词： NDRG2 pPROEX-HTb 融合表达 纯化
