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泪液采集载体和保存温度对泪液蛋白质定量研究的影响
目的:比较三种泪液采集载体(进口吸附滤纸、国产吸附滤纸和泪液采集毛细管)在不同储存温度条件下对泪液蛋白保存的影响,为科学地选择泪液采集方式、准确测定泪液中的不同类型的蛋白分子提供实验依据.方法:表面硅化处理的玻璃毛细管,国产泪液试纸及进口泪液试纸吸附等体积等量的血清白蛋白、胎牛蛋白或已知浓度的IL-1 Ra、IL-6、MIG、IP-10、MMP-9、TIMP1、VEGF和HBD1标准品混合液后放于无菌离心管并分别保存于4℃、-20℃和-80℃.以适当的洗脱液进行洗脱后,用Micro BCATM和酶联免疫吸附法分别检测总蛋白浓度和各种特异性蛋白浓度.结果:洗脱缓冲液中是否添加表面活性剂或蛋白酶抑制剂对滤纸载体的蛋白洗脱率没有显著影响.-20℃和-80℃保存条件下,三种泪液采集载体对样本总蛋白的平均洗脱率没有显著性差异.IL-6在三种泪液采集载体中的平均洗脱率均较高,且载体之间及不同保存温度环境之间均没有显著的差异.滤纸和毛细管载体对IL-1 Ra和HBD1的滞留效应差异较大:IL-1 Ra在滤纸和毛细管载体中的平均洗脱率分别为19％±15％和98％±6％;HBD1在滤纸和毛细管载体中的平均洗脱率分别为93％±8％和61％±3％.MIG在毛细管收集载体中的平均洗脱率显著高于滤纸载体,分别为87％±4％和69％±4％.毛细管载体对MMP-9和TIMP1的平均洗脱率分别为90％±5％和103％±7％,同样显著高于滤纸(分别为62％±3％和87％±5％).样本载体保存于-80℃ 环境时,其洗脱液中VEGF和IP-10的平均洗脱率分别为82％±5％和72％±8％,明显高于其他温度环境保存的样本载体.结论:检测泪液中不同目的蛋白时,需综合考虑采集方法和保存温度条件,选择经济可靠的方法.用毛细管采集泪液适合大多数的蛋白定量检测,检测IL-1 Ra、IP-10、MIG、MMP-9和TIMP1的泪液适合用毛细管进行采集.但是对于有明显极性的蛋白,例如HBD1,则要事先试验有效的收集和保存方法.
