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反复-70℃冻融对人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞中肿瘤干细胞的杀伤作用
目的:研究反复-70℃冻融对人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞中肿瘤干细胞的杀伤作用.方法:复苏OCM-1细胞,使用标准DMEM/F12培养基培养后,改用无血清化学限定培养基(serum-free medium,SFM)培养,并分离纯化肿瘤干细胞(choroidal melanoma stem cells,CMSCs).分别对OCM-1和纯化的CMSCs反复-70℃冻融后,MTT比较杀伤比率的差异.光镜及共聚焦显微镜观察细胞形态学改变.结果:在标准DMEM/F12培养基中贴壁生长的OCM-1细胞,使用SFM培养基培养后,贴壁细胞明显减少,第6代的CMSCs细胞,均为悬浮团状集落生长,呈现典型的干细胞生长方式,CD133阳性比率达到79.8%,Musashi-1强阳性表达.MTT比色法显示,反复-70℃冻融对OCM-1和CMSCs的杀伤比率存在显著差异.光镜及共聚焦显微镜观察发现,冻融后OCM-1细胞出现大量的凋亡细胞,而CMSCs则以坏死为主,凋亡细胞少见.结论:反复-70℃冻融对分化良好的OCM-1细胞主要是诱导其凋亡.而OCM-1中存在的肿瘤干细胞CMSCs对冷冻更加敏感,冻融后大量死亡,这是肿瘤在冷冻治疗后发生退变消失的根本原因.
关键词： 脉络膜黑瘤 肿瘤干细胞 反复冻融(6):1278-1282 -
深低温反复冻融对人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞内钙离子浓度的影响
目的:研究人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞经深低温反复冻融后细胞内钙离子的变化及其与凋亡的关系.方法:OCM-1细胞经-70℃冻融后,流式细胞仪检测细胞的凋亡比率,激光共聚焦显微镜观察细胞的形态学改变并检测细胞内钙离子浓度.结果:OCM-1细胞冻融1,2,3次后,流式细胞仪显示细胞发生较高比例的凋亡,且随着冻融次数的增加而升高,凋亡比率(%)分别为12.4±1.4,30.3±1.0,38.0±1.9.共聚焦显微镜观察到细胞内钙离子荧光强度随着细胞凋亡比率的增高而升高,细胞内钙离子荧光强度分别为938.5±42.8,974.5±36.9,1 362.8±73.3.结论:深低温冻融能诱使OCM-1细胞内钙离子浓度发生改变,从而导致肿瘤细胞凋亡.
