首页 > 文献资料
-
RNA干扰PCGF4/Bmi-1抑制白血病K562细胞系增殖
目的:利用RNAi方法针对PCGF4/Bmi-1基因,抑制其在慢性髓性白血病K562细胞中的过表达,观察K562细胞的增殖性改变.方法:RT-PCR检测PCGF4/Bmi-1基因在K562中的表达情况.利用Invitrogen公司RNAi慢病毒表达载体系统,构建针对PCGF4/Bmi-1基因慢病毒RNAi表达载体.转染K562细胞,瞬时干扰PCGF4/Bmi-1基因的表达,实时定量PCR检测干扰前后基因表达变化.利用生长曲线测定干扰载体转染前后细胞生长速度变化.结果:PCGF4/Bmi-1慢病毒RNAi表达载体成功地构建,并建立瞬时干扰PCGF4/Bmi-1基因的K562细胞系.实时定量PCR检测,PCGF4/Bmi-1基因在K562细胞系中过表达被显著抑制.生长曲线测定,PCGF4/Bmi-1基因干扰后细胞增殖明显变慢.结论:干扰PCGF4/Bmi-1基因,降低该基因表达后能明显减低细胞的生长速度.
-
下调TSG101基因对人结肠癌细胞LOVO生长的调节作用
目的:探讨TSG101基因对人结肠癌细胞生长的调节作用.方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入LOVO细胞,获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和western blot进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;Western blot检测细胞转染前后细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK6、p21和p27的表达变化.结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体;筛选到稳定的TSG101低表达的结肠癌细胞模型;转染TSG101小干扰RNA后的细胞生长速度显著减慢,出现G1期阻滞,且Cyclin D1的表达明显降低,p21的表达明显增高.结论:下调TSG101基因能抑制结肠癌细胞生长,提示该基因可能具有临床应用前景.
