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E264文献资料
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乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响
目的 通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响.方法 通过融合PCR扩增含基因组第1769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为rJEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析rJEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响.结果 成功构建了回复突变株rJEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异.rJEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lgPFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病.结论 在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力.
