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半套式RT-PCR文献资料
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西部马脑炎病毒基因组序列的半套式RT-PCR检测
为进一步提高RT-PCR检测西部马脑炎病毒(WEE)病毒基因组方法的敏感性,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列.首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA,然后以此cDNA为模板,进行扩增.对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化,以进一步提高扩增的特异性.结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度,其半套式扩增出特定大小的DNA产物;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性.扩增产物约为190bp的单一DNA片段,其大小与预期的相一致.结果表明采用半套式RT-PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高100倍以上.
