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高原花斑裸鲤过氧化氢酶(CAT)基因的克隆鉴定表达及其对Cu2+胁迫的应答
目的 对高原花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)过氧化氢酶(catalase,CAT)基因做克隆鉴定表达,并对其做Cu2+胁迫的应答分析,为进一步研究抗氧化酶类与氧化应激之间的关系,筛选其为有效生物标记物提供理论依据.方法 采用RT-PCR和RACE技术获得高原花斑裸鲤CAT全长cDNA序列,分析生物信息学特征及在不同组织的表达分布特征.在Cu2+的胁迫下,通过Real-time PCR检测高原花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中CAT在转录水平上的应答规律.并对上述结果行有效分析.结果 CAT基因(命名为GeCAT,GenBank登录号为MG762770)的完整编码序列全长2263 bp,含5'-UTR 158 bp、3'-UTR 440 bp和完全开放阅读框(ORF) 1665 bp,ORF编码555个氨基酸.在Cu2+胁迫下,高原花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中的GeCAT在转录水平相对表达量呈现出一定的规律性:均先升高后降低.结论 获得了花斑裸鲤CAT基因的生物信息学特征和表达分布特点,初步分析了Ge CAT对Cu2+胁迫的应答模式.
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高原花斑裸鲤Cu/Zn-SOD的克隆鉴定表达及其对Cu2+胁迫的应答
目的 对高原花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)铜锌-过氧化物岐化酶(Cu/Zn-Superoxide Dismutase,Cu/Zn-SOD)基因的克隆鉴定表达及对其Cu2+胁迫的应答分析.方法 采用RT-PCR和RACE技术获得G.eckloni Cu/ Zn-SOD全长cDNA序列,分析生物信息学特征和在不同组织的表达分布.在Cu2+的胁迫下,通过实时定量PCR检测花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中Cu/Zn-SOD的表达变化,探究其是否能够作为响应重金属污染胁迫的一种生物标记物.结果 Cu/ Zn-SOD的cDNA序列全长785 bp,其中3'-UTR为277 bp,5'-UTR为43 bp,编码区为465 bp,可编码154个氨基酸(GenBank登录号为:KX826080).在Cu2+胁迫下,花斑裸鲤肝、肾、脑、鳃组织中的GeCu/ Zn-SOD在mRNA水平相对表达量呈现出一定的规律性.结论 成功实现高原花斑裸鲤Cu/Zn-SOD的克隆鉴定表达,初步得到了花斑裸鲤Cu/Zn-SOD对Cu2+胁迫的应答模式.
