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烫伤大鼠结肠动力基本功能单位细胞损害和内质网应激研究
目的 了解严重烫伤大鼠结肠壁内神经运动末梢-肌间从cajal间质细胞(ICC)-平滑肌细胞超微结构改变以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)表达情况,探讨其在烫伤大鼠结肠动力损伤中的可能机制.方法 采用简单随机法将50只SD大鼠分为烫伤组(40只):大鼠造成30%TBSA Ⅲ度烫伤,伤后腹腔注射乳酸林格液(50 mg/kg)复苏.于伤后3、6、12、24 h处死大鼠,在距盲肠约5 cm处剪取近端结肠4 cm肠管,取中间各1 cm分别用体积分数3%戊二醛及体积分数10%甲醛固定.对照组(10只)除不烫伤外,其余处理同烫伤组.取戊二醛固定的标本,透射电镜下观察大鼠肠道细胞变化情况.取甲醛固定的标本,采用免疫组织化学法检测结肠壁中GRP78和caspase-12的表达.结果 透射电镜下,对照组大鼠结肠平滑肌细胞排列整齐,肌细胞内细胞器丰富,核居中,常染色质均匀,线粒体嵴较多、滑面内质网较少,肌间丛神经元细胞器丰富,紧邻肌让丛神经元可见ICC;烫伤组肠道平滑肌细胞形状不规则,排列紊乱,核周隙增宽,细胞内有溶解性大空泡,线粒体空泡样变,嵴溶解、固缩,粗面内质网扩张并部分溶解,ICC核周细胞质明显减少.烫伤组伤后3、6、12 h GRP78评分分别为(4.3±0.9)、(6.0±0.7)、(4.8±1.1)分,均高于对照组[(2.4±0.7)分,P<0.05];烫伤组伤后6～24 h caspase-12评分均高于对照组(P<0.05).对照组细胞均有GRP78表达,烫伤组强度染色主要出现在黏膜和肌间神经丛、间质细胞,而平滑肌细胞多呈轻中度染色.烫伤后3、12 h GRP78呈阳性表达,伤后6 h呈强阳性.caspase-12在伤后3 h阳性表达不明显,伤后6、24 h表达呈弱阳性,伤后12 h表达呈阳性;对照组未见caspase-12表达.结论 严重烫伤后大鼠结肠壁内神经运动末梢-肌间丛ICC-平滑肌细胞存在明显病理改变,这与内质网过度应激启动caspase-12凋亡通路致细胞损伤可能有关.
关键词： 烧伤 结肠 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氮酸蛋白酶12 葡萄糖调节蛋白78
