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一测多评法同时测定冬虫夏草中5个核苷类成分的含量
目的:建立一测多评法同时测定冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2'-脱氧腺苷含量,并验证方法准确性.方法:采用RP-HPLC进行含量测定,使用Agilent ZOBAX SB-AQ C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～5 min,0％A;5～15 min,0％A→10％A;15～30 min,10％A),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长260 nm,进样量5 μL.以腺苷为参照物,建立其对尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷的相对校正因子,并用该校正因子进行尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定冬虫夏草中5个核苷的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2'-脱氧腺苷进样量分别在4.945～98.90、1.852～37.04、4.795～95.90、5.175～103.5和1.892～37.84 μg· mL-1范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.3％(RSD=1.6％)、101.3％(RSD=1.3％)、100.6％(RSD=1.1％)、98.8％(RSD=1.4％)和101.1％(RSD=1.7％).尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷相对于腺苷的相对校正因子分别为1.41、1.90、1.74和0.964;且在不同实验条件下重现性良好(RSD＜3.0％);一测多评法的计算结果与外标法实测值之间无显著差异.20批冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和2'-脱氧腺苷的含量范围分别为0.101％～0.210％、0.037％～0.135％、0.066％～0.203％、0.015％～0.102％和0.001 8％～0.013％.结论:建立的一测多评法可作为冬虫夏草中5个核苷类化学成分的含量测定方法.
