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UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中他莫西芬与其主要活性代谢物及药动学研究
目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中他莫西芬及其2种主要活性代谢物的浓度,并应用于大鼠口服他莫西芬后的药动学研究.方法:血浆样品中加入适量氘代内标,以甲醇沉淀蛋白处理后,采用UPLC BEH Shield RP18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱分离,以水(含3.5 mmol·L-1甲酸铵,甲酸调节pH至3.5)为流动相A,甲醇(含3.5 mmol·L-1甲酸铵,甲酸调节pH至3.5)为流动相B;以0.5 mL·miR-1的流速进行梯度洗脱,柱温35℃,进样量2μL,样品分析时间为3 min.质谱采用多反应离子监测(MRM)的扫描模式,以电喷雾离子源(ESI)在正离子电离模式下进行测定.选择性监测质荷比为m/z 372.5→72.0(他莫西芬),m/z 388.5÷72.0(4-羟基-他莫西芬),m/z 374.5→58.0(4-羟基-N-去甲基-他莫西芬),m/z 377.5→72.0(他莫西芬-ds),m/z 393.5→72.0(4-羟基-他莫西芬-d5),m/z 379.5→58.0(4-羟基-N-去甲基-他莫西芬-ds).结果:他莫西芬、4-羟基-他莫西芬和4-羟基-N-去甲基-他莫西芬分别在0.956 8～382.7 ng·mL-1、0.500 8～200.2 ng·mL-1和0.500 4～200.2ng·mL-l浓度内呈良好的线性关系.方法学各项指标均符合要求.药动学参数分别为T1/2:(28.00±2.53)、(8.56±0.51)、(13.24±2.20)h,Cmax:(39.97±3.24)、(2.72±0.25)、(2.55±0.13)ng·mL-1,Tmax:(3.17±0.98)、(5.50±1.23)、(12.00±0.00)h,AUC0-t:(302.62±17.22)、(26.92±1.68)、(82.14±3.75)h·ng· mL-1,AUC0-∞:(344.19±16.72)、(32.22±1.50)、(88.00±4.91)h·ng· mL-l.结论:本法经方法学验证,适用于大鼠血浆中他莫西芬及其主要活性代谢物的测定.
