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多聚磷酸核糖基核糖醇文献资料
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高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖及游离多糖的含量
目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的多糖及游离多糖含量.方法:将疫苗中的有效抗原成分—Hib多糖,其结构为多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP),用6 mol·L-1盐酸进行水解,得到其核糖醇(ribitol)单体;使用CarboPac(R) MA1阴离子交换柱(4 mm×250 mm),以580 mmol·L-1氢氧化钠溶液为流动相,流速为0.4 mL· min-1,柱温35℃,进样体积100 μL,脉冲安培检测器收集信号,核糖醇的含量以峰面积计算得到,再根据核糖醇占PRP干重的质量分数(41.3％),计算出Hib结合疫苗中PRP及游离多糖(Free PRP)的含量,并评估该方法的重复性和再现性.结果:核糖醇质量浓度在0.075～1.05μg·mL-1范围内,与峰面积响应值呈良好的线性关系(r=-0.999 9),低检测限为2.5 ng·mL-1;标准品供试溶液连续进样6次,峰面积及保留时间的RSD均小于5％;核糖醇加标回收率在80％～120％之间;对来自5个企业的4个不同批次的Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量进行测定,结果均符合规定.结论:本方法在测定Hib结合疫苗的PRP及Free PRP含量时,样品前处理简单,分离效果好,且灵敏度高,结果稳定,可靠,对控制该疫苗的质量具有重要意义.
