首页 > 文献资料
-
从生食鱼肉中提取GⅡ型诺如病毒的不同方法的比较
目的 本研究比较了多种可能适用于生食水产鱼肉中诺如病毒(NoV)的提取方法.方法 人工污染GⅡ型NoV三文鱼肉样品,通过病毒洗脱、浓缩、核酸提取,以及实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测等步骤的比较和优化,提高样品中NoV的检测成功率和回收率.结果 采用Tri/Glycine/Beef extract缓冲溶液洗脱、PEG/NaCl溶液沉降、增加氯仿-正丁醇(1∶1,V/V)溶液萃取等步骤,可以有效富集样品中的NoV,并有效去除样品中的PCR抑制成分.优化后的检测方案可以将人工污染GⅡ型NoV的鱼肉样品的回收率由不足3％提高至15.15％,检测灵敏度可以达到17.3 RT-PCRU/25 g.结论 优化后的病毒提取方法具有良好的耐用性和重现性,适合于生食水产鱼肉中NoV的快速检测.
-
直接免疫荧光与实时荧光定量反转录PCR检测常见呼吸道病毒抗原比较
目的 观察病毒抗原直接免疫荧光检测(direct fluorescence assay,DFA)和实时荧光定量反转录PCR(real-time reverse-transcription PCR,rt-RT-PCR)检测住院儿童鼻咽分泌物呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)和流感病毒(influenza virus,FLU)的一致性.方法 应用DFA、rt-RT-PCR方法检测92例呼吸科住院患儿鼻咽分泌物RSV,应用DFA、rt-RT-PCR方法检测162例呼吸科住院患儿鼻咽分泌物FLU-A和FLU-B,比较2种方法检测的阳性率,Kappa检验分析2种检测方法的一致性.结果 DFA检测RSV的阳性率56.5％低于rt-RT-PCR检测RSV的阳性率70.7％ (P＜0.05),一致性良好(Kappa=0.517);DFA检测FLU-A、FLU-B的阳性率分别为3.7％和7.4％,rt-RT-PCR检测FLU-A、FLU-B的阳性率分别为8.0％和15.4％,2种方法检测FLU-A阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05),一致性较差(Kappa=0.168),检测FLU-B阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05),一致性良好(Kappa=0.489).结论 rt-RT-PCR检测呼吸道病毒的阳性率明显高于DFA,但2种方法的一致性良好,DFA因设备简单适合用于呼吸道病毒的早期诊断.
关键词： 呼吸道病毒 直接免疫荧光 实时荧光定量反转录PCR 儿童 -
实时荧光定量RT-PCR、细胞培养法和鸡胚培养法在流感检测中的对比分析
目的 比较本实验室已有的3种流感病毒检测方法的差异,以确定它们在不同情形下的适用方向.方法 通过实时荧光定量反转录PCR、细胞培养和鸡胚培养3种方法同时检测488份流感样病例(ILI)鼻咽拭子样本,计算出它们的灵敏度和特异度,并进行统计分析.结果 实时荧光定量RT-PCR、细胞培养和鸡胚培养的阳性检测率分别为16.80％、6.76％、3.07％;相对于实时荧光定量RT-PCR,细胞培养的灵敏度为40.24％,特异度为100.00％,鸡胚培养的灵敏度为18.29％,特异度为100.00％;与细胞培养相比,鸡胚培养的灵敏度为45.45％,特异度为100.00％.结论 3种方法在灵敏度方面差异很大,但在特异性上没有差异.由于实时荧光定量RT-PCR具有很高的灵敏度,并且检测速度快,适用于暴发疫情的应急检测;细胞培养和鸡胚培养作为经典的病毒分离方法,可以获得流感毒株,用来开展抗原性、基因特性和耐药性等深入研究.
关键词： 实时荧光定量反转录PCR 细胞培养 鸡胚培养 流感病毒 -
胃癌患者的血清乳酸脱氢酶水平及其基因在癌组织的表达与患者预后的相关性研究
目的：探讨胃癌患者的血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）水平及癌组织中该基因的表达与患者预后的相关性。方法2012～2013年经某院病理确诊的胃癌患者的术前血清标本及癌组织标本各60例，检测血清标本的LDH水平，并使用实时荧光定量反转录PCR的方法检测60例患者的正常胃组织、癌组织及淋巴结组织中 LDH基因的表达。后，将血清 LDH水平和胃癌组织中 LDH基因的差异表达与患者的临床病理特征进行相关性分析，其中多样本比较采用单因素方差分析，两样本比较使用独立t检验。结果胃癌患者血清LDH为340.89±10.67 IU/ml，显著高于对照组（t＝24.7，P＜0.01）；胃癌组织及淋巴结组织中 LDH的相对表达量分别是正常组织的3.39及2.35倍。与临床病理特征的相关性分析提示血清 LDH的升高与 pTNM分期及是否有淋巴结转移相关（t＝5.2，4.8，P 值均＜0.01），胃癌组织LDH的高表达与肿瘤大小、pTNM分期及是否有淋巴结转移相关（t＝18.2，15.3，F＝7.2，P值均＜0.01）。结论胃癌患者的血清 LDH水平及其组织中 LDH基因表达显著升高，其高表达与患者预后相关。检测血清 LDH 水平及胃癌组织中LDH表达可能成为评估胃癌患者预后的潜在指标。
关键词： 胃癌 乳酸脱氢酶 预后 实时荧光定量反转录PCR
