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"咖啡环"效应文献资料
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样品成份对"咖啡环"法DNA检测的影响
目的 调查样品中常见成份对"咖啡环"法DNA检测的影响. 方法 将含有不同浓度SDS、NaCl等的DNA-EB滴加到载玻片上,室温自然蒸发,用凝胶成像系统观察荧光沉积形貌(Deposition Pattern,DP)、计算积分光密度(Integrated Optical Density,IOD),分析量效关系. 结果 低浓度非DNA成份存在时, DP仍以环状沉积为主,但有年轮环、放射纹等成份特异性细微差异.浓度高时, DP因成份而异,可为环+散在光点型(NaCl)、中央光斑+弱小环型(SDS)、同心或年轮状多环型(TritonX-100)、环+斑点型(H+)等.非DNA成份对DNA含量估计有不同程度影响,但估计值多数在0.5~2倍以内.结论 样品成份对DNA的DP和IOD均有影响,但不影响DNA含量的粗略估计,且能提供样品纯度和残留物信息.
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用"咖啡环"法估测DNA含量
目的 探讨DNA-溴化乙锭形成的"咖啡环"用于DNA含量的测定.方法 将DNA与溴化乙锭混合,滴加在载玻片等载体上,蒸发后用凝胶成像系统观察、拍照,分析DNA的成环条件、环荧光强度与DNA浓度的相关性,以及"咖啡环"法评价DNA的灵敏度、适用范围等.结果 DNA-溴化乙锭溶液在载玻片、透明聚苯乙烯板等载体表面蒸发后可形成荧光环.在玻片上2μL点样时,DNA检出限可达到2ng/μL.在2ng/μL~1000ng/μL范围内,DNA浓度与环积分光密度拟合Logistic方程(R2=0.999).结论 "咖啡环"法简单、快速,设备要求低,可用于DNA含量的高效、快速测定.
