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探讨两种实验方法在检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌中的临床应用
目的 评价改良Hodge试验(MHT)及Carba NP试验(CNPt)在检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌中的临床应用价值,以确立佳的筛选方法 .方法收集该院2014年3月—2016年3月经法国生物梅里埃vitek2 compact全自动药敏鉴定系统所鉴定的对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌80株.用荧光定量PCR检测其碳青霉烯酶基因blaKPC、blaNDM、blaOXA-48、blaIMP、blaVIM、blaSME;再用MHT及CNPt对所收集的细菌进行碳青霉烯酶检测.结果 MHT检出阳性菌株51株,CNPt检出阳性菌株72株,分别与PCR结果进行比较,CNPt与耐药基因检测结果符合率更高.结论 CNPt可代替MHT作为检测碳青霉烯酶的筛选方法,应用于临床.
关键词： 改良Hodges试验 CarbaNP试验 碳青霉烯酶基因 -
Carba N P试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值研究
目的 评价Carba NP试验用于产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌和鲍氏不动杆菌的应用价值.方法 将2014年-2015年临床分离的耐碳青霉烯类抗菌素肠杆菌科细菌39株和鲍氏不动杆菌37株,采用Carba NP 试验检测碳青霉烯酶;并采用PCR方法检测碳青霉烯酶相关基因,评价该试验的灵敏度和特异性.结果 26株肠杆菌科细菌PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测肠杆菌科的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为96.1%、94.8%、92.5% 和97.3%;21株鲍氏不动杆菌 PCR检出碳青霉烯酶相关基因,Carba NP试验检测鲍氏不动杆菌的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别为4.7%、100.0%、100.0% 和45.9%.结论Carba NP试验能快速检出携带 KPC、NDM-1、IMP-1和VIM-2基因肠杆菌科细菌的碳青霉烯酶,未能检出携带OX A-23基因的鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶.
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产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制
目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.
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西司他汀在肠杆菌科细菌Carba NP试验中的影响评价
目的 评估西司他汀对肠杆菌科细菌Carba NP试验的影响.方法 选取无锡市第二人民医院、无锡市第四人民医院2016年1-12月肠杆菌科细菌非重复菌株163株,分别以亚胺培南标准品、亚胺培南/西司他汀为底物进行Carba NP试验.结果 按照美国临床实验室标准化协会标准选取碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌83株,以亚胺培南标准品、亚胺培南/西司他汀分别为底物检测时Carba NP试验诊断产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的敏感度、特异度均为100％;二者所有试验均在1 h内完成检测.结论 以亚胺培南标准品、亚胺培南/西司他汀为底物时Carba NP试验均能快速、准确筛查出产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,以亚胺培南/西司他汀为底物时成本低,西司他汀对Carba NP试验无影响.
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Carba NP试验检测碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的临床应用
目的 探讨Carba NP试验检测碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的临床应用.方法 收集碳青霉烯类抗生素耐药的51株肠杆菌科细菌,K-B法药敏试验检测常规药物敏感性,E-test法检测试验菌株对碳青霉烯类抗生素的低抑菌浓度(MIC)值;分别用改良Hodge、Carba NPⅠ试验筛选碳青霉烯酶表型;然后用Carba NPⅡ试验进行碳青霉烯酶表型分类,E-test法测定金属酶,用PCR检测耐药基因.结果 41株Carba NPⅠ试验阳性且经Carba NPⅡ试验证实为产B类金属酶菌株,PCR均证实携带NDM-1基因型.结论 Carba NP试验方便快捷、结果易于判断,与耐药基因检测符合程度高,适合实验室常规开展.
