MLK3与乳腺癌的关系

目的:随着社会经济的迅猛发展,人民生活水平的提高及生活方式的改变,近年来乳腺肿瘤已成为女性常见疾病,尤其是乳腺癌已成为女性常见的恶性肿瘤之一,严重影响女性的身心健康甚至危及生命.乳腺癌的发生发展、转移扩散是多基因参与,多阶段多步骤完成的复杂过程.近年来,国内外学者对MLK3在恶性肿瘤方面的研究日益加深,已有文章报道了MLK3与恶性肿瘤发生与发展机制的信号传导有关.本文通过国内外相关文献进行归纳总结,对MLK3与乳腺癌的关系及其研究进展作一综述.

Our previous study showed that when glutamate receptor (GluR)6 C terminus-containing pep-tide conjugated with the human immunodeficiency virus Tat protein (GluR6)-9c is delivered into hippocampal neurons in a brain ischemic model, the activation of mixed lineage kinase 3 (MLK3) and c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) is inhibited via GluR6-postsynaptic density pro-tein 95 (PSD95). In the present study, we investigated whether the recombinant adenovirus (Ad) carrying GluR6c could suppress the assembly of the GluR6-PSD95-MLK3 signaling module and decrease neuronal cell death induced by kainate in hippocampal CA1 subregion. A seizure model in Sprague-Dawley rats was induced by intraperitoneal injections of kainate. The effect of Ad-Glur6-9c on the phosphorylation of JNK, MLK3 and mitogen-activated kinase kinase 7 (MKK7) was observed with western immunoblots and immunohistochemistry. Our findings revealed that overexpression of GluR6c inhibited the interaction of GluR6 with PSD95 and prevented the kainate-induced activation of JNK, MLK3 and MKK7. Furthermore, kainate-mediated neuronal cell death was signiifcantly suppressed by GluR6c. Taken together, GluR6 may play a pivotal role in neuronal cell death.

MLK3介导的腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠缺血性脑损伤的保护作用

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对海马CA_1区神经元的保护和MLK3表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒处理组、非表达病毒处理组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织MLK3表达的情况.结果 表达病毒处理组与缺血再灌注对照组、空载病毒处理组及溶剂组相比,海马CA_1区神经元损伤明显减轻,脑组织MLK3表达明显降低(P<0.05).结论 腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过降低脑组织中MLK3的表达对海马CA_1区神经元起保护作用.

MLK3信号通路在癫痫及脑缺血海马CA3区神经元中的不同作用

目的:研究混合性谱系激酶3(MLK3)信号通路对癫痫及脑缺血海马CA3区神经元的作用.方法:采用海人藻酸(KA)或四动脉结扎法分别建立大鼠癫痫及全脑缺血模型,运用免疫印迹技术检测在KA注射后及脑缺血再灌注后不同时间海马CA3区MLK3和c-Jun的N端激酶(JNK)的活化水平;采用焦油紫染色,观察大鼠海马CA3区神经元的损伤.结果:KA刺激6h,癫痫大鼠海马CA3区MLK3和JNK明显激活,1d后仍维持在较高水平(P＜ 0.05);MLK3和JNK的总蛋白表达并无显著改变.脑缺血大鼠海马CA3区,缺血再灌注后各时间点,MLK3和JNK并未出现明显的活化.此外,大鼠致痫后7d,海马CA3区神经元大量死亡;缺血再灌注后7d,海马CA3区神经元并未受到明显损伤.结论:MLK3/JNK信号通路参与了癫痫脑损伤海马CA3区神经元的损伤;但并未介导缺血性脑损伤海马CA3区神经元的存活.

野生型MLK3真核表达载体的构建及其表达

目的 构建野生型MLK3真核表达质粒并转染至COS-7细胞中表达.方法 以大鼠海马总RNA为模板,通过RT-PCR分段扩增MLK3的序列,采用酶切、链接的方法先将目的基因克隆至pGEM-T,筛选正确的质粒后,再亚克隆至pcDNA3.1(+).以脂质体转染法将构建好的重组质粒转染至COS-7细胞,通过免疫印迹鉴定重组质粒的表达.结果 限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型MLK3的序列正确.免疫印迹显示,转染的重组质粒在相对分子质量92×103处有相应条带出现.结论 成功构建了MLK3的真核表达质粒,重组质粒在COS-7细胞中高效表达.

K252a对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的保护作用

目的 观察K252a(MLK3阻断剂)对内毒素性急性肺损伤大鼠肺病理组织学改变及生存率的影响.方法 采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制内毒素性急性肺损伤模型.90只大鼠随机分为6组(n=15):对照组(control组)、LPS 组、K252a 50 μg/kg组(K50组)、K252a 75 μg/kg组(K75组)、K252a 100 μg/kg组(K100组)和溶剂对照组(DMSO组).模型制备成功后6 h取肺脏进行光镜检查,观察48 h内大鼠死亡情况并比较累计生存率.结果 48 h内LPS组、K50组、K75组和K100组以及DMSO组大鼠生存率分别为6.3%、27%、72%、57%及6.7%.光镜下可见LPS组大鼠肺组织结构明显被破坏,主要表现为肺泡内出血、肺间质水肿、肺泡萎陷以及肺组织内大量炎性细胞浸润.与LPS组相比,预先应用K252a组肺组织的损伤程度较轻微、肺间隔轻度增宽、无明显出血、少量炎性细胞浸润,尤其K75组,减轻程度明显.结论 K252a延迟LPS大鼠死亡时间,并呈现剂量依赖性,75 μg/kg K252a剂量可以明显提高其生存率.并可改善内毒素性急性肺损伤大鼠肺脏的病理组织学结果.

缺血性脑损伤中血晶素通过抑制MLK3信号通路保护大鼠海马CA1区神经元

目的:探讨血晶素对海马CA1区神经元的保护和MLK3表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、血晶素处理组及溶剂组.分别采用焦油紫染色和免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织MLK3表达的情况.结果:血晶素处理组与缺血再灌注对照组和溶剂组相比,海马CA1区神经元损伤程度明显减轻,MLK3的表达降低(P<0.05).结论:血晶素对大鼠脑缺血后海马CA1区神经元起到很好的保护作用,其机制可能通过降低该区MLK3的表达而实现的.

谷氨酸受体-6在海人藻酸致痫大鼠发病机制中的作用

目的 研究谷氨酸受体-6(GluR6)在癫痫发病中的分子机制.方法 采用海人藻酸(KA)腹腔注射SD大鼠,用免疫沉淀、免疫印迹的方法检测在KA注射后不同时间点海马CA3区GluR6·PSD95·MLK3信号模块的组装.同时使用免疫组化和免疫印迹的方法观察小肽Tat-GluR6-9c对MLK3磷酸化水平的影响.结果 KA诱导了大鼠海马CA3区GluR6·PSD95·MLK3信号模块的组装,在KA刺激6h和12h达到结合高峰,1d后开始降低;而Tat-GluR6-9c抑制了KA注射6h MLK3的激活(P<0.05).结论 KA受体GluR6通过GluR6·PSD95·MLK3信号模块,激活了MLK3,参与了KA诱导的脑损伤.