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乙肝病毒标志物常见模式与HBV-DNA检出量的比较分析
目的:探讨乙肝病毒免疫标志物常见模式与HBV-DNA量的关系.方法:采用荧光定量PCR法对150份测定的血清标本进行乙肝病毒标志物与HBV-DNA定量测定.结果:2l份HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性标本,HBV-DNA全部阳性,平均拷贝数为3.5×108;6价HBsAg、HBeAg阳性的标本也均为阳性,平均拷贝数为1.2×109;27例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性的标本中HBV-DNA阳性12例,平均拷贝数7.5×106;24例HBsAg、HBcAb阳性的模式中阳性8例,平均拷贝数8.5×105;其它HBsAb阳性和全阴性血清HBV-DNA都呈阴性.结论:提示FQ-PCR可以检测HBV的真实感染和复制状态,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效观察有较大的指导意义.
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内含子或外显子缺失DMD家系女性携带者的基因诊断
目的 对内含子和(或)外显子缺失的Duchenne型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家系女性成员进行致病基因携带者的诊断,为进一步行产前诊断或植入前遗传学诊断提供准确的信息.方法 利用dystrophin基因5个微卫星位点(STR-44、45、49、40、5'DysⅡ)的多态性连锁分析,同时结合半定量PCR对1个内含子和外显子均缺失的DMD家系(家系5)和1个仅内含子缺失的DMD家系(家系4)的女性成员进行携带者基因诊断.结果 家系5的Ⅱ2的STR-50位点基因型为245/245,不是DMD基因携带者.家系4的Ⅱ6、Ⅱ8的STR-45位点基因型为del/172,Ⅲ19为del/178,均为DMD基因携带者.结论 STR-PCR多态性分析结合内含子半定量PCR可获得更多诊断信息,更准确地检出内含子缺失的女性携带者,提高诊断率.
关键词： 肌营养不良症 短串联重复序列多态性 定量聚合酶链反应 携带者检测 -
用定量PCR从杂交阳性融合噬菌斑中分离候选插入片段
目的 为了在cDNA文库杂交筛选目的基因过程中,当复筛的杂交信号对应于1个多克隆融合噬菌斑时,能够快速、准确地分离出特异克隆的插入片段.方法 依据定量PCR扩增的原理,利用初始模板量的不同,通过两次PCR反应,鉴定和分离出所需cDNA片段.结果 利用这一方法,在β-1,4-半乳糖苷转移酶cDNA的"步移"复筛中,从一个双克隆融合斑中,得到了特异性克隆的插入片段,经测序证实为β-1,4-半乳糖苷转移酶的5′cDNA序列,长1.9kb,从而完成了全长cDNA的克隆,节省了进行再次复筛的时间和材料.结论 该方法简便、快捷,可以显著地节省时间和实验材料,在新基因克隆中有一定的实用价值.
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肝核受体激动剂T0901317对大鼠骨骼肌细胞脂肪酸转运酶基因表达影响的实验研究
目的 探讨肝核受体(LXRs)激动剂T0901317对正常SD大鼠骨骼肌细胞中脂肪酸较运酶(FAT/CD36)基因mRNA表述的影响.方法 将原代培养的5只SD大鼠骨骼肌细胞分为T0901317 1μmol/L作用组、0.5μmol/L作用组和未作用(阴性对照)组,采用SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组SD大鼠骨骼肌细胞FAT/CD36基因mRNA表达水平,并进行比较分析.结果 1μmol/L、0.5μmol/L作用组与阴性对照组比较,差异无显著性意义(P=0.116).结论 LXRs激动剂39901317对SD大鼠骨骼肌细胞中FAT/CD36基因mRNA的表达水平没有明显作用,提示T0901317在促进SD大鼠骨骼肌细胞内脂肪酸的堆积作用尚无确切的证据.
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1 031例乙肝病毒携带者HBV-DNA含量与血清标志物的关系
目的探讨乙型肝炎病毒携带者血清中HBV-DNA定量结果与乙肝血清标志物的关系.方法采用定量聚合酶链反应(PCR)法检测1 031例乙型肝炎病毒携带者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比研究.结果血清HBeAg阳性组HBV-DNA含量明显高于抗HBe或抗HBc阳性组.结论定量PCR法检测HBV-DNA具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解病毒复制情况,督促乙肝携带者治疗及制定治疗方案、疗效观察提供了确切依据.
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内毒素血症大鼠心肌病理学及肌钙蛋白表达改变及其意义
目的 探讨脓毒症大鼠心肌损伤病理学及肌钙蛋白的改变及其意义.方法 将20只SD大鼠随机分为内毒素组与对照组各10只,前者经尾静脉注射内毒素7 mg/kg,对照组注射等量生理盐水;药物注射后24、48h分别处死动物,心肌经过处理后,进行病理学镜下形态观察.并通过PCR方法检测心肌细胞cTnⅠ表达量.结果 内毒素组大鼠24 h后心肌细胞缩小,心肌纤维转疏松,注射内毒素48h后心肌细胞周围可见淋巴细胞增多,心肌细胞间隙可见血管扩张,内有红细胞.内毒素注射后24、48 h心肌细胞cTnⅠ表达量明显降低.结论 内毒素血症可引起大鼠心肌细胞病理学改变及cTnⅠ表达降低,是脓毒症大鼠的重要病理生理学改变.
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两种方法检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较
目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)与普通定性PCR检测血清HBVDNA结果的差异.方法:同时采用荧光标记(AmpliSensor)定量PCR方法及普通定性PCR两种方法对132例乙型肝炎血清样品进行HBVDNA检测,并分析其相关性,比较其差异.结果:132例中应用荧光定量PCR方法检测HBV DNA阳性率为78.0%(103/132),定性PCR方法检测HBV DNA阳性率为59.8%(79/132),两种方法的HBVDNA检出率比较具有显著性差异(P＜0.01).结论:荧光定量PCR与普通定性PCR相比具有一定的优势,完全可以取代定性PCR方法,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测.
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慢性乙型肝炎血清HBV DNA基因检测及临床意义
目的探讨不同类型慢性乙型肝炎(慢乙肝)病人病毒复制水平与HBV标志物(HBVM)模式及肝损害程度的关系.方法180例慢性乙型肝炎(轻度80例、中度70例、重度30例)病人血清HBVDNA含量采用荧光标记(AmpliSensor)定量PCR方法检测,HBVM检测采用ELISA法.结果血清HBV DNA含量与HBVM模式有关,血清HBeAg阳性组HBVDNA含量(106.35±1.84)显著高于HBeAg阴性组(104.73±1.88)(P＜0.01),慢乙肝轻度、中度病人HBVDNA含量(105.58±1.92,106.27±2.05)与慢乙肝重度病人HBVDNA含量(105.73±1.90)相比较无显著性差异(P＞0.05),且不同HBV DNA水平病人的TBil、ALT、AST差别无显著性(P＞0.05).结论血清HBeAg的存在影响HBV DNA的水平变化,随着肝损害程度的加重,慢性乙型肝炎轻度、中度、重度病人血清HBV DNA基因含量未发生显著变化,同时血清HBV DNA含量与TBil、ALT、AST水平无明显关系.
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HBV 低水平复制状态下慢性乙型肝炎(中度)患者的临床表现分析
目的:通过对血清HBV DNA含量不同的慢性乙型肝炎患者(中度)的临床表现进行分析,了解HBV低水平复制状态下慢性乙型肝炎患者(中度)的临床表现.方法:应用荧光定量PCR技术检测慢性乙型肝炎(中度)患者血清中HBV DNA含量,按照HBV DNA水平的高低进行分组,对不同组别患者的临床表现进行对比分析,探讨HBV低水平复制对病情的影响.结果:HBV DNA含量≤103copies/ml组的总胆红素(TBil)为(37.7±56.3)μmol/L,均高于其它各组,差别有统计学意义,P＜0.05;而且其丙氨酸氨基转移酶(ALT)为(406±338)U/L,也高于HBVDNA含量分别为104、107和≥108copies/ml三组,差别有统计学意义,P＜0.05.从HBVDNA含量为≤103组、105组和107copies/ml组的TBil和ALT的恢复曲线来看,三者非常相似,具有显著相关性,P＜0.05.不同组别间年龄和住院日相比均无统计学差异(P＞0.05).结论:血清中HBVDNA含量的高低与慢性乙型肝炎(中度)患者的病程和病情轻重没有明显的相关性;HBV的低水平复制并不能代表患者的病情较轻.
关键词： 乙型肝炎病毒 慢性乙型肝炎(中度) 乙型肝炎病毒核酸 定量聚合酶链反应
