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养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞作用蛋白组学的生物信息学分析＊
目的：对养心通脉有效部位方（apr-YTF）应用于骨髓间充质干细胞（BMSCs）的作用蛋白组学蛋白进行生物信息学分析。方法：根据核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）蛋白组学技术确定的apr-YTF对BMSCs作用靶点的差异蛋白，通过DAVID数据库搜索软件结合GO数据库搜索，进行注释和富集度分析， KEGG数据库进行信号转导通路分析；VISANT数据库检索蛋白质相互作用。结果：差异蛋白主要参与102种生物学过程、35种细胞组分、6种分子途径，差异蛋白主要参与3条信号转导通路，这些蛋白在3条信号转导通路上相互发生作用。结论：处于差异蛋白功能交互网中交叉点位置的Presenilin-1、Presenilin-2通过Notch 信号通路，Syntaxin-4蛋白通过可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白附着蛋白（SNARE）信号通路，丝裂原活化蛋白激酶12（MAPK12）通过MAPK信号通路在apr-YTF诱导BMSCs向心肌分化过程中发挥重要作用，养心通脉有效部位方对骨髓间充质干细胞的作用是在多位点、多环节、多种生物学进程中发挥作用的，蛋白质组学生物信息学技术可以站在“整体观”的角度对中医药的作用机制作出预测，结合分子生物学验证是一条很好的中医药现代化途径。
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养心通脉有效部位方对 BMSCs移植心血瘀阻证心肌的实验研究
目的：观察养心通脉部位方（ Active Principle Region of Yangxing Tongmai Formula，apr－YTF）对大鼠骨髓间充质干细胞（ Bone Mesemchymal Stem Cells，BMSCs）移植心血瘀阻证心肌后分化为心肌样细胞的作用。方法：采用“冠脉结扎法”结合血流变学改变建立大鼠心血瘀阻证模型。然后将大鼠分为（ apr－YTF）＋BMSCs组、集落刺激因子（ rhG－CSF）＋BMSCs组、NS＋BMSCs组、NS＋DMEM组。原代培养大鼠BMSCs，体外溴氮胞苷（5－bromouracil Deoxyriboside Brdu）标记后注射至大鼠心肌，采用双染法观察心肌组织中心肌结蛋白Desmin－Brdu和肌球蛋白重链（ Myosin Heavy Chain MHC）－Brdu的表达。结果：apr－YTF干预BMSCs移植心血瘀阻证心肌28 d后经心肌结蛋白Desmin－Brdu抗体染色后，NS＋DMEM组梗死边缘未见双染表达，在NS＋BMSCs组、（ rhG－CSF ）＋BMSCs和（ apr－YTF ）＋BMSCs 组均可有猩红色 Brdu抗体和棕色Desmin蛋白的同时表达，其中（rhG－CSF）＋BMSCs和（apr－YTF）＋BMSCs组阳性细胞计数高于NS＋BMSCs组（P＜0．05）；（ rhG－CSF）＋BMSCs组和（ apr－YTF）＋BMSCs组两者之间差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论：apr－YTF能促使移植于心血瘀阻证心肌环境后BMSCs向心肌细胞的方向分化。
关键词： 养心通脉有效部位方 骨髓间充质干细胞 心肌梗死/中医药疗法 细胞移植 -
养心通脉有效部位方干预AMI大鼠BMSCs miRNA组学分析
目的:通过筛选差异表达miRNAs,预测和探究养心通脉方有效部位方(active principle region of Yangxing Tongmai formula,apr-YTF)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)心肌样分化的分子机制.方法:提取急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)血瘀证大鼠BMSCs并培养,使用apr-YTF含药血清诱导,以阴性对照血清做对照,提取细胞总RNAs,使用表达谱芯片检测细胞miRNAs的表达,并进行聚类分析.运用生物信息学方法预测差异miRNA调控的靶基因和功能分析.结果:芯片探测出共有26个差异miRNAs,其中8个上调,18个下调,经筛选和预测共100个靶基因参与了19种生物过程,11种细胞成分,10种分子作用.轴突导向通路,癌症转录误调节通路,AMPK信号通路被富集.rno-miR-93-5p,rno-miR-204-5p,rno-miR-128-3p为网络调控中心,其中rno-miR-204-5p下调更显著.结论:养心通脉有效部位方干预大鼠骨髓间充质干细胞心肌样分化的机制可能与rno-miR-204-5p,rno-miR-93-5p,轴突导向通路相关性较高.
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基于iTRAQ结合质谱技术的养心通脉有效部位方对大鼠BMSCs作用蛋白的探讨
目的:采用核素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白组学技术分析养心通脉有效部位方(apr-YTF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的作用蛋白.方法:SD大鼠按照每天31.08 g·kg-1给予养心通脉有效部位方灌服,以灌服等量生理盐水大鼠含药血清为空白对照,5d后取含药血清干预BMSCs,提取细胞的膜蛋白,运用液相色谱基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)筛选并鉴定差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析.结果:鉴定出236个蛋白,差异蛋白62个,其中表达上调的蛋白有48个,表达下调的蛋白有14个;这些蛋白主要参与102种生物学过程,35种细胞组分,6种分子途径和3条信号转导通路,这些蛋白在3条信号转导通路上相互发生作用.结论:由结果推测处于差异蛋白功能交互网中交叉点位置的早老蛋白-1(presenilin-1),presenilin-2通过Notch信号通路,突触融合蛋白-4(syntaxin-4)通过可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白附着蛋白(SNARE)信号通路,丝裂原活化蛋白激酶12(MAPK12)通过MAPK信号通路在apr-YTF诱导BMSCs向心肌分化过程中发挥重要作用.
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养心通脉有效部位方对梗死心肌细胞因子分泌、血管新生及动员MSCs归巢的影响
探讨养心通脉有效部位方(apr-YTF )对梗死心肌细胞因子分泌、血管新生及动员骨髓间充质干细胞( MSCs)归集的影响.方法:取急性心肌梗死造模成功的SD雄性大鼠32只,随机分为apr-YTF组、香丹注射液组、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)组和模型对照组4组,每组8只;均于造模3h后给予相应药物,连续5d.经masson' s三色染色检测心肌癫痕组织微小血管密度,免疫组化的方法检测心肌组织中CD34+细胞、Ⅷ因子、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子受体(Flk-1)的含量表达.结果:单个高倍视野下apr-YTF组和rhG-CSF组的心肌毛细血管数较模型组显著增加(P< 0.01);与模型组比较,2组的CD34+细胞、Flk-1,bFGF表达显著增加(P<0.01),2组的Ⅷ因子表达亦增加(P < 0.05 ),apr-YTF组的VEGF表达比模型组显著增加(P <0.01 ),rhG-CSF组的VEGF表达较模型组亦增加(P<0.05)0结论:apr-YTF能促进Ⅷ因子、Flk-1,VEGF,bFGF的分泌,促进血管新生.促进大鼠外周血MSCs归巢于急性梗死的心肌,有利于急性梗死心肌的修复.
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养心通脉有效部位方与急性心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的动员及定向归巢
背景:急性梗死心肌修复过程中,寻找可有效提高外周血骨髓间充质干细胞的数量、并动员其定向归巢于损伤心肌的骨髓间充质干细胞动员剂尤为关键.目的:探讨养心通脉有效部位方对急性心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞动员入血及定向归巢于梗死心肌的影响.方法:养心通脉有效部位方主要成分包括人参皂苷、丹参酮ⅡA、总生物碱、人参多糖等,由中南大学药学院依课题组稳定的制作工艺制作提供.SD大鼠70只,取8只大鼠作为正常对照组,剩余62只大鼠建立急性心肌梗死模型.取造模成功的32只大鼠,随机分为养心通脉有效部位方组、复方丹参注射液组、重组人粒细胞集落刺激因子组、模型对照组,各组均于造模3 h后给与对应药物,连续5 d.流式细胞仪检测外周血CD34+细胞数,免疫组化染色检测梗死心肌边缘区CD34+细胞数.结果与结论:与模型对照组比较,重组人粒细胞集落刺激因子组、养心通脉有效部位方组外周血CD34+细胞数均明显增加(P < 0.01);心肌梗死边缘区胞浆CD34+细胞数均显著增加(P < 0.01).与重组人粒细胞集落刺激因子组比较,养心通脉有效部位方组心肌梗死边缘区胞浆CD34+细胞数显著增加(P < 0.01).养心通脉有效部位方能促进骨髓干细胞动员入血,并定向归巢于梗死心肌,其作用与重组人粒细胞集落刺激因子大体相当,在归巢CD34+细胞方面甚至强于重组人粒细胞集落刺激因子,是一种良好的骨髓间充质干细胞动员剂.
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养心通脉方研究述评
养心通脉方是我国著名中医学家秦伯未先生运用“扶养心气,和通血脉”之法治疗胸痹心痛的有效名方,现在已经提取其有效成分制成养心通脉有效部位方.目前多位学者已经在临床疗效评价、基础机理方面开展研究,发现临床方面治疗冠心病心血瘀阻证、高脂血症、高脂血症伴胰岛素抵抗具有较好的疗效,能有效的改善临床症状和生化指标.在机理学方面发现养心通脉方能够改善心肌缺血、增加冠状动脉血流量、促进血管再生、动员骨髓间充质干细胞参与缺血心肌的修复等功能,并通过蛋白质组学技术发现了其作用的相关蛋白.
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养心通脉有效部位方对MSCs向心肌样细胞分化的影响
目的 观察养心通脉有效部位方对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞的诱导作用.方法 体外培养大鼠MSCs,设养心通脉有效部位方(YTF)组、5-氮胞苷(5-aza)阳性对照组和低糖DMEM组,体外诱导分化心肌样细胞；用免疫细胞化学方法观测其心肌肌丝蛋白( Desmin)、肌球蛋白重链(MHC)的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达.结果 大鼠MSCs体外向心肌样细胞分化诱导后,在DMEM组中未发现Desmin和MHC阳性细胞；而YTF组和5-aza组的Desmin及MHC免疫组化染色均可见阳性免疫复合物,与DMEM组比较,YTF组和5-aza组Desmin、MHC、GATA-4 mRNA表达的相对光密度(IOD)值均明显提高(P＜0.01,P＜0.05),而且YTF组Desmin、MHC的IOD也明显高于5-aza组(P＜0.05),但YTF组GATA-4 mRNA的IOD值与5-aza组比较无统计学差异.结论 YTF在体外可诱导MSCs向心肌样细胞分化.
