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临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究
目的 对医院细菌室送检粪便标本中分离出的艰难梭菌,进行毒素基因以及耐药基因的初步分析.方法 将细菌室收集到的112份粪便标本,经选择性厌氧培养,谷氨酸脱氢酶(GDH)以及API 20A生化条鉴定后,分离出12株艰难梭菌,分别采用PCR的方法检测tcdA和tcdB基因、二元毒素基因,克林霉素抗性基因(ermB).结果 12株艰难梭菌中8株为毒素基因阳性,其中tcdA+tcdB+为5株,占62.5%;tcdA-tcdB+为3株,占37.5%;二元毒素基因均为阴性;耐药基因ermB阳性为4株,占50%.结论 艰难梭菌tcdA-tcdB+毒株所占比例增加,临床单独检测A毒素易造成漏检;艰难梭菌耐药现象值得关注.
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艰难梭菌实验室快速鉴定方法检验效能的比较
目的 评价3种艰难梭菌实验室鉴定方法的快速性及准确性.方法 2013年6月至2013年11月,收集136名ICU患者共248份标本进行24 h、48 h厌氧培养,并进行鉴定,同时对大便标本提取DNA进行tcdB毒素基因检测.以48 h培养结果为参考标准,评价24小时培养法和PCR扩增tcdB基因法鉴定艰难梭菌的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值.结果 136名ICU发生腹泻的患者中,11名患者共有12份标本48 h培养为艰难梭菌阳性,艰难梭菌感染率为8.09％ (11/136),标本阳性率为4.84％(12/248).24小时培养法及PCR扩增tcdB基因法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为75.00％、100％、100％、98.74％和83.33％、99.15％、83.33％、99.15％.结论 提取大便DNA tcdB毒素基因是快速、灵敏度和特异度均较高的方法;48小时培养法时间相对较长,但稳定可靠,并可以保留菌株进行后续试验;24小时培养法,时间短、简便但会漏诊某些阳性病例.
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实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因
目的 建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因,并探讨其应用价值.方法 根据艰难梭菌基因组设计tcdB基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcdB基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值.结果 荧光定量PCR法低检测限为1×10-3 ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0％、99.1％、85.7％和98.1％.结论 实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcdB基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断.
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中国艰难梭菌高分离株和欧洲流行高毒株tcdA、tcdB基因转录及其毒素的表达
目的 研究和比较中国艰难梭菌A-B+高分离株BJ08和欧洲流行A+B+高毒株(BI/NAP1/027)UK1的tcdA、tcdB转录和毒素表达.方法 每隔3 h提取艰难梭菌和培养上清,用实时荧光定量PCR的方法测定各个时间段BJ08和UK1菌株 tcdA、tcdB基因的表达;用ELISA的方法检测BJ08和UK1菌株各个时间段的细胞和培养上清液中A毒素、B毒素的含量.结果 BJ08的生长速率显著大于UK1;BJ08不表达A毒素,但是检测到tcdA基因的转录,tcdA基因表达量显著低于UK1; tcdB的表达以及B毒素在两种菌株的培养上清液中和声波处理的细胞内的差异都不大.结论 中国艰难梭菌A-B+高分离株BJ08和欧洲流行A+B+高毒株UK1的B毒素的转录和表达没有明显差异,BJ08菌株在中国有爆发流行的可能.
