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益肺逐积方诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制
目的:通过体外实验观察益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性、细胞凋亡以及表皮生长因子受体(EGFR),G蛋白偶联受体30 (GPR30)蛋白表达的影响,探讨中药复方益肺逐积方抑制肺癌细胞活性,诱导肺癌细胞凋亡的作用机制.方法:将人肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,益肺逐积方高、低质量浓度组分别加入2,1.5 g·L-1益肺逐积方培养液,5-氟尿密啶(5-FU)组加入2.5 g·L-1 5-FU培养液,溶剂组加入含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液,分别作用24,48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性的影响;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色观察益肺逐积方作用不同时间后人肺腺癌A549细胞的凋亡形态学变化;流式细胞术(FCM)测定益肺逐积方作用下人肺腺癌A549细胞的凋亡率;利用倒置显微镜观察益肺逐积方作用24,48 h后A549细胞的形态学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定人肺腺癌A549凋亡细胞EGFR,GPR30蛋白的表达.结果:与溶剂组比较,1.5,2 g·L-1益肺逐积方均能抑制人肺腺癌A549细胞活性(P＜0.05),诱导A549细胞发生不同程度的凋亡形态学改变;流式细胞术检测显示,益肺逐积方作用24,48 h后,可使人肺腺癌A549细胞其发生晚期凋亡(P＜0.05);Western blot结果显示,益肺逐积方可以不同程度地下调人肺腺癌A549细胞GPR30,EGFR蛋白的表达(P＜0.05).结论:益肺逐积方可抑制人肺腺癌A549细胞活性、诱导其发生晚期凋亡,并使其发生凋亡形态学改变,这可能与下调EGFR,GPR30蛋白表达有关.
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益肺逐积方联合环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织CD151、整合素α3及β1 mRNA表达水平的影响
目的 研究益肺逐积方联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织CD151、整合素(integrin,ITG)α3及ITGβ1mRNA表达水平的影响.方法 C57BL/6小鼠右前肢腋窝皮下接种Lewis细胞建立肺癌小鼠模型,随机分为模型组、CTX组、益肺逐积方组、联合用药组,每组10只,造模次日益肺逐积方组和模型组分别给予益肺逐积方(14.95g/kg)和等体积生理盐水灌胃,1次/d;CTX组在造模后72h和10d腹腔注射CTX(40mg/kg);联合用药组在CTX组基础上灌胃益肺逐积方.给药期间观察小鼠状态及成瘤情况,给药14d后测量体重、瘤体积计算抑瘤率;常规石蜡切片检测肿瘤组织病理变化;荧光定量PCR检测肿瘤组织CD151、ITGα3及ITGβ1mRNA表达.结果 与模型组比较,益肺逐积方组与联合用药组肿瘤体积减小(P＜0.05);抑瘤率由高到低依次为:联合用药组、益肺逐积方组、CTX组.病理学检测结果显示肿瘤组织呈实片状排列并向骨骼肌浸润,肿瘤细胞沿细支气管壁及肺泡壁弥漫性生长.与模型组比较,益肺逐积方组、CTX组及联合用药组CD151mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),联合用药组ITGα3mRNA表达量降低(P＜0.05).与CTX组比较,益肺逐积方组ITGβ1mRNA的表达量降低(P＜0.05).结论 益肺逐积方与CTX联合用药可更有效抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,益肺逐积方可通过下调肿瘤组织CD151和ITGα3及ITGβ1mRNA表达水平,达到治疗肺癌的功效.
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益肺逐积方对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤组织CD151及整合素α3β1蛋白表达的影响
目的:观察益肺逐积方联合环磷酰胺对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤组织CD151及整合素(integrin,ITG)α3β1蛋白表达的影响.方法:C57 BL/6小鼠40只右前肢腋窝皮下接种Lewis细胞建立肺癌小鼠模型,随机分为肿瘤模型组、环磷酰胺组、益肺逐积方组、联合用药组,每组均为10只.益肺逐积方组灌胃中药液(14.95 g·kg-1);环磷酰胺组在接种后72 h和10 d腹腔注射环磷酰胺(40mg·kg-1);联合用药组在环磷酰胺组用药基础上灌胃中药液(14.95 g·kg-1);模型组灌胃等体积生理盐水,每天1次,共14 d.给药期间观察小鼠生存状态及成瘤情况,给药14 d后测量瘤体积,常规石蜡切片术检测肿瘤及肺脏病理学改变,免疫组织化学检测肿瘤组织CD151和ITG α3β1蛋白的表达量.结果:与肿瘤模型组比较,益肺逐积方组与联合用药组肿瘤体积显著减小(P＜0.05).病理学检测结果显示,益肺逐积方组肿瘤细胞体积明显减小,病理性核分裂象减少,小鼠肺部无典型转移灶,肿瘤组织沿细支气管壁及肺泡壁弥漫性生长;联合用药组肿瘤细胞大量坏死,肺部无典型转移灶,肿瘤组织明显减少.免疫组织化学检测结果显示,益肺逐积方组与联合用药组均可下调CD151和ITGα3β1蛋白表达量,与肿瘤模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:益肺逐积方有显著抑制Lewis肺癌肿瘤生长的作用,且可增强环磷酰胺的疗效,益肺逐积方可能通过下调肿瘤组织CD151和ITGα3β1蛋白的表达量,发挥抑制肺癌转移的功效.
