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ISSR分子标记快速预测远志中sibiricose A5和sibiricose A6的含量
目的:优化远志简单重复序列区间(ISSR)扩增多态性反应体系,设计一对聚合酶链式反应(PCR)引物用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricoseA6的含量高低.方法:采用UPLC测定远志药材中sibiricose A5与sibiricose A6的含量,通过单因素试验优化远志ISSR反应体系,利用ISSR分子标记技术筛选出与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关的特异性DNA片段,针对此片段设计特异性PCR引物.结果:7批远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量差异较大,变化范围分别为0.895 4 ～3.227 6,0.6442～2.0578 mg·g-1.对筛选出的与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关片段(890-8)进行克隆测序后,设计出了1对特异性引物(YZ-SA),可用于快速预测远志药材中sibificose A5和sibiricose A6的含量高低.结论:优化后的远志ISSR反应体系具有标记位点清晰、检测多态性能力强等特点,设计出的特异性引物可用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量高低.
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用随意扩增多态性DNA PCR方法检查实验小鼠的嗜肺性巴氏杆菌
嗜肺性巴氏杆菌是动物致病菌,人感染多通过猫、狗咬伤或抓伤而致.嗜肺性巴氏杆菌是实验啮齿动物(特别是小、大鼠和豚鼠)巴氏杆菌病的主要病原菌.为了鉴定从实验小鼠分离的15株嗜肺性巴氏杆菌的基因型,本文用3个随机引物(每个引物不得由0个碱基组成),用RAPD-PCR方法对分离的15株嗜肺性巴氏杆菌进行扩增试验,以鉴定这15株嗜肺性巴氏杆菌的基因分型.本试验所用的15份测试菌株标本采自小白鼠,编号1～15号.24?h培养物离心沉淀,收集嗜肺性巴氏杆菌,细菌用PBS洗2次,再用单蒸水洗1次,沉淀物加0.7ml无菌水悬起,样品于100℃温度下加热煮沸5?min,迅速放冰水中冷却,直接用于PCR扩增,毋须提取DNA.3个随机引物的名称及碱基序列如下:OPL-7 5′AGG CGG GAA C-3′;ORL-11 5′ ACG ATG AGC C-3′;OPL-12 5′GGG CGG TAC C-3′,每次反应只用1个引物(图1).
