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丹参含药血清对肝星状细胞Hh通路中SuFu和DYRK2表达的影响
观察丹参含药血清对瘦素刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂(SuFu)和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2 (DYRK2)表达的影响.清洁级SD大鼠(60只)给予丹参水煎剂、生理盐水、秋水仙碱,连续灌胃10 d制备丹参含药血清.体外培养的肝星状细胞(HSCs),除空白对照组外,其余各组均予瘦素100μg·L-1刺激24h,各组含药血清干预后置于37℃,5％ CO2孵箱中培养.24h后收集细胞,采用MTT法检测HSCs的增殖,分别采用RT-PCR和Western blot法测定SuFu和DYRK2的表达情况.用瘦素刺激大鼠HSCs后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与空白组比较P ＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显降低(与空白组比较P＜0.01或P＜0.05).抑制剂组(cyclopamine)、丹参含药血清、秋水仙碱组干预后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜0.01).在模型组的基础上加入Hh通路激动剂(purmorphamine)充分活化后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显降低(与模型组比较P＜0.01).用丹参含药血清干预激动剂组后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜ 0.01).丹参含药血清可通过干预瘦素诱导的HSCs中SuFu和DYRK2的表达,进而影响HSCs的活化增殖.
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microRNA-622调控DYRK2在结肠癌中表达并促进结肠癌细胞SW1116侵袭转移
目的 探讨微小RNA622(microRNA-622,miR-622)及双重特异性酪氨酸调节激酶2(DYRK2)在结肠癌组织及结肠细胞系SW1116、SW480中的表达情况并研究其对SW1116侵袭转移能力的影响.方法 选取82例结肠癌及癌旁组织标本,培养结肠癌细胞系SW1116、SW480及正常结肠上皮细胞系NCM460细胞.Real time PCR检测组织及细胞中miR-622的表达,Real time PCR、免疫组织化学、Western blot检测DYRK2基因及蛋白的表达并行Pearson相关性分析.在SW1116中转染miR-622 mimics上调miR-622表达,同时对照(NC)组转染阴性序列并验证,Real time PCR及Western blot进一步检测上调miR-622后SW1116中DYRK2基因及蛋白表达水平,同时用Transwell法检测SW1116细胞侵袭转移能力的变化.结果 Real time PCR及Western blot结果显示,相比于癌旁组织和正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌组织及结肠癌细胞SW1116中miR-622 mRNA呈高表达而DYRK2 mRNA及蛋白呈低表达,两者表达呈明显负相关(r=0.916,P＜0.01).转染miR-622 mimics后,Real time PCR及Western blot结果显示,相比于NC组,miR-622 mimics组DYRK2 mRNA及蛋白表达水平减低(P＜0.01).相应的,Transwell结果显示,相比于NC组,SW1116细胞转染miR-622 mimics后侵袭转移能力明显增强(P＜0.01).结论 结肠癌中miR-622呈高表达而DYRK2呈低表达,上调miR-622可负性调控DYRK2表达并促进SW1116细胞侵袭转移.
