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地黄酪氨酸脱羧酶基因的克隆与表达分析
酪氨酸脱羧酶TyDC是植物次生代谢的催化酶,在苯乙醇苷类成分的生物合成中发挥重要作用.根据地黄转录组数据,克隆了地黄酪氨酸脱羧酶基因RgTyDC的全长cDNA序列(GenBank登录号KU640395),并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其在地黄不同组织及4种诱导子处理后毛状根中的表达量.结果表明,RgTyDC ORF为1 619 bp,编码509个氨基酸,相对分子质量为56.6 kDa,等电点pI 6.25.RgTyDC与芝麻酪氨酸脱羧酶SiTyDC和猴面花酪氨酸脱羧酶EgTyDC的同源性高,均为88％.RgTyDC基因在叶片(尤其是衰老的叶片)中表达量较强,在块根中表达量较低.SA和MeJA处理后显著上调表达.这为进一步研究RgTyDC在地黄苯乙醇苷类成分生物合成中的分子功能奠定基础.
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阿特拉津对青春期大鼠黑质区多巴胺能神经元的损伤作用
目的:探讨阿特拉津对青春期大鼠黑质区多巴胺能神经元的损伤作用.方法:将4周龄的Wistar雄性大鼠40只随机分为4组,分别为对照组(1%甲基纤维素)、阿特拉津低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)和高(200 mg/kg)剂量组,每组10只,连续灌胃45 d后处死.收集中脑黑质部分,采用免疫组织化学法(SP法)检测神经元细胞中酪氨酸羟化酶(TH)的变化,并采用实时定量PCR法(qPCR)和Western blot检测多巴胺能神经元损伤相关基因mRNA和蛋白的表达情况.结果:免疫组化结果显示,200 mg/kg ATR组中TH阳性细胞数较对照组显著减少,差异具有统计学意义(P<0.01).qPCR结果显示,与对照组相比,100和200 mg/kg ATR染毒组TH mRNA和Bcl-2 mRNA的表达量显著降低;200 mg/kg ATR组p53 mRNA和Caspase-9 mRNA的表达量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,100和200 mg/kg ATR染毒组TH和Bcl-2的蛋白表达量显著降低;100和200 mg/kg ATR组p53蛋白表达量显著增加;50、100和200 m g/kg A TR组Caspase-9蛋白表达量均显著增加,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:阿特拉津可以影响大鼠黑质区多巴胺能神经元损伤相关基因mRNA和蛋白的表达.
