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  • 广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变体的构建

    作者:王亚琴;张宇瑶;贺红;李颛;邓志成;金华;黎广卫

    该研究以从感染了青枯病的广藿香植株中分离的青枯菌菌株PRS-84为供试菌株,利用电击转化法,对青枯菌进行Tn5转座子插入突变,在含卡那霉素的培养基上筛选抗性克隆.对抗性克隆进行卡那霉素抗性基因的PCR鉴定,并利用反向PCR技术获得转化子Tn5转座子插入位点的侧翼序列并进行序列测定与分析.结果 表明,青枯菌感受态细胞经电击转化后,获得了抗性克隆.经PCR扩增,抗性克隆在预计的约700 bp处出现特异性条带.反向PCR扩增获得了转化子Tn5转座子插入位点的侧翼序列,经序列测定及同源性分析,初步推测3个突变体的Tn5转座子插入位点基因分别为typA基因、recO基因和gidA基因.该研究建立了广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变体系,获得了青枯菌Tn5转座子插入突变体,为构建广藿香青枯菌突变体库及发现青枯菌致病基因奠定了基础.