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乳移平调控前转移微环境抑制乳腺癌肺转移的实验研究
目的 观察抗乳腺癌复发转移方剂乳移平对乳腺癌前转移肺微环境的影响,探讨其可能机制.方法 动物实验分两部分,第一部分是乳腺癌前转移时间的确定,第二部分是乳移平对前转移微环境的影响.第一部分实验24只BALB/c小鼠,取对数生长期4T1细胞配成细胞悬液,血细胞计数板计数,细胞浓度调至1×106细胞/mL,无菌条件下接种于24只BALB/c小鼠胸壁右侧第四乳头的脂肪垫上,每只0.1 mL.第二部分动物实验60只BALB/c小鼠,采用随机数字表法分成5组,分别为空白组、模型组、乳移平低、中、高剂量组,每组12只.造模方法同上,各组于接种次日开始给药.乳移平低、中、高剂量组给予5.13、10.26及20.52 g/(kg·d)生药量灌饲,每天给药1次,连续14天.空白组和模型组等体积生理盐水灌饲.动物实验第一部分于10、14、18、22天,每次脱颈处死6只,观察肺转移情况.动物实验第二部分观察各组肺组织的镜下形态(光镜)和肺血管超微结构(电镜),测定各组血管的通透性(依文思蓝法),研究乳移平对前转移微环境形成的影响.通过Western blot和Real time PCR法测定乳移平对前转移因子血管生成素(angiogenin,Angpt)2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素(Interleukin,IL)-6和IL-1 β表达的影响.结果 肺转移还未发生的乳腺癌前转移时期的建模时间定为14天.与模型组比较,乳移平中、高剂量组对瘤重、瘤体积都有显著的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),乳移平对肿瘤的重量和体积的抑制作用随着乳移平剂量的增加而增加,呈现明显的剂量依赖关系(P ＜0.05,P＜0.01).模型组与乳移平低剂量组都有淋巴细胞浸润的发生,而乳移平中、高剂量组光镜结果发现肺组织形态与空白组无区别.肺部的血管网是由连续的、密集的毛细血管组成.空白组肺脏毛细血管结构正常.模型组血管壁不像空白组平整、规则,毛细血管扩张明显.乳移平给药后,血管的损伤情况得到改善,血管形态基本和空白组无异.与空白组比较,模型组肺组织中依文思蓝渗出量明显增加,Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,乳移平各剂量组依文思蓝的渗出量均显著降低,且中药剂量越高,降低越明显,呈现剂量依赖关系(P＜0.01),乳移平中剂量组VEGF、乳移平高剂量组Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β的蛋白及mRNA表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),乳移平中剂量组IL-6蛋白表达降低(P＜0.01).结论 乳移平对肿瘤的生长和前转移微环境的形成都有很好的调节作用,它可能通过抑制Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β表达、保护脉管系统的完整性、阻碍前转移微环境的形成,终抑制肺转移的发生.
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从CXCL12/CXCR4生物学轴探讨乳移平配伍引经药抗乳腺癌肺转移机理体外研究
目的:探讨“乳移平”配伍肺经引经药“桔梗”对人乳腺癌肺高转移细胞株MDA-MB-231HM的增殖、趋化、迁移能力的影响及作用机制.方法:乳移平组、乳移平配伍桔梗组、乳移平配伍川牛膝组、阿霉素组和对照组SD大鼠含药血清的制备,MTT法测不同组合药血清对细胞增殖能力的影响,Transwell小室测细胞趋化活性的影响,实时定量PCR法测细胞CXCL12、CXCR4、PI3K的表达.结果:与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步抑制MDA-MB-231HM的增殖能力(P＜0.01)和趋化活性(P＜0.01).实时定量PCR结果提示,与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后能进一步下调MDA-MB-231HM细胞株CXCL12、CXCR4基因(P＜0.05).结论:乳移平配伍桔梗通过进一步下调CXCL12/CXCR4生物学轴及其介导的PI3K信号转导通路,发挥进一步的抑制乳腺癌肺高转移细胞株增殖能力和趋化活性的作用.
关键词： 乳腺癌 肺转移 乳移平 桔梗 CXCL12/CXCR4生物学轴 -
乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究
目的 研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法 ①制备不同浓度的乳移平含药血清(10％、20％、30％、40％),并以10％、20％、30％、40％空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选佳作用浓度和佳作用时间.②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10％乳移平含药血清组、TGF-β120％乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h.采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响.结果 ①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10％和20％作用浓度,48 h作用时间用于后续实验.②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响.结论 乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关.
关键词： 乳移平 含药血清 4T1细胞 TGF-β/Smads信号通路 -
乳移平对不同乳腺癌肺转移动物模型VEGF蛋白表达和MVD计数影响的研究
目的 从乳腺癌血管生成相关因子VEGF及MVD计数的角度探讨乳移平抑制不同乳腺癌肺转移的机理及模型间的差异.方法 对BALB/c(SPF级)裸鼠和津白Ⅱ号(TAⅡ)小鼠分别采用人乳腺癌肺高转移细胞株MDA-MB-435和小鼠乳腺癌细胞株MA-891原位接种造模,随机分为乳移平组、环磷酰胺组和生理盐水组.每组小鼠给予相应药物4周后脱颈处死,称量记录瘤重,计算瘤重抑制率,计数肺转移结节数;免疫组化法检测VEGF蛋白,计数MVD.结果 乳移平具有明显抑制不同乳腺癌肺转移模型肿瘤生长和降低肺转移发生的作用,可以降低不同模型肿瘤组织VEGF蛋白的表达,同时降低MVD数量,其中以对MDA-MB-435模型的作用更为明显.结论 乳移平对不同乳腺癌肺转移模型均表现出抑瘤和抗转移作用,但对各模型的敏感性不同;乳移平对肿瘤组织VEGF蛋白表达的下调作用和降低MVD计数、抑制血管新生的作用与其抑制肿瘤肺转移关系密切.
