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柑橘衰退病毒柚类分离株的分子鉴定
应用限制性片段长度多态性(RFLP)、双向逆转录-聚合酶链式反应(BD-PCR)、序列分析等技术对我国部分地区柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)柚类分离株进行了鉴定分析.结果表明:柚类以受相对单一的CTV株系侵染为主;柚类上的优势流行株系属于p25/Hinf Ⅰ RFLP 6组群(占79.4%)和p23/BD-PCRⅢ组群(占84.1%);在对柚类CTV分离株S051～S058及国外CTV分离株PB61、T30、T36、T385、SY568、VT、NUAGA的p23、p25基因序列分析中,S051与弱毒株PB61的同源性高;S052与弱毒株T30、T385的同源性高;S053、S054、S055、S056、S057、S058与其它CTV分离株的同源关系均较远,并在系统发生树上形成了独立的分枝.
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肺癌易感性标记物与肺癌关系的病例对照研究
目的探讨谷胱甘肽转移酶(GST)和细胞色素CYP1A1、CYP2E1多态性与肺癌易感性的关系.方法用病例对照研究方法,收集广东籍新发原发性肺癌病人91例及同期非肺部疾患住院病人91例作对照,采用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测病例和对照的CYP1A1、CYP2E1和GSTM1基因多态性.结果CYP1A1突变型(m2m2)与野生型(m1m1)比较,OR值1.51;CYP2E1C1C1型与C1C2型比较,OR值1.80;C2C2型与C1C2型比较,OR值5.48;GSTM1基因缺失型与正常型比较;OR值1.26.两种基因联合分析结果表明:GSTM1基因缺失并携带CYP1A1 m2m2与GSTM1基因正常并携带CYP1A1 m1m1者比较,OR值2.29,GSTM1基因缺失并携带CYP2E1 C1C1型者与GSTM1基因正常并携带CYP2E1C1C2型者比较,OR值2.13,携带CYP1A1 m2m2型以及CYP2E1 C1C1型者与携带CYP1A1 m1m1型和CYPE1 c1c2型者比较,OR值3.00.3种基因联合作用分析结果表明:携带CYP1A1 m2m2型以及CYP2E1 C1C1型并且GSTM1基因缺失者比携带CYP1A1 m1m1型和CYP2E1 c1c2型且GSTM1基因正常者提高了患肺癌的危险性,OR值3.97.结论CYP1A1、CYP2E1和GSTM1在单因素分析中末显示出与肺癌风险的联系,2个基因和3种基因的联合作用似乎可以提高患肺癌的危险性,但无统计学意义.提示这3种基因均不是肺癌个体易感性的主效基因,可能是次效基因.
关键词： 细胞色素P450 多态性 肺癌 PCR 限制性片段长度多态性(RFLP) -
我国4种白蛉的核糖体内转录间隔2区PCR-RFLP多态性分析
采用PCR-RFLP方法对我国内脏利什曼病传播媒介中华白蛉(Phlebotomus chinensis)、吴氏白蛉(Ph.wui)、长管白蛉(Ph.longiductus)和亚历山大白蛉(Ph.alexandri)等4种白蛉的核糖体内转录间隔2区(ITS2)进行分型.PCR-RFLP结果显示,以限制性内切酶Dra I酶切ITS2片段,可分出4种RFLP带型,即A为450 bp,B为154 bp/127 bp/93 bp/66 bp/10 bp,C为311 bp/80 bp/60 bp,D为353 bp/300 bp/160 bp/58 bp.结果显示,4种白蛉均只有1种RFLP带型,中华白蛉为AA型,亚历山大白蛉为BB型,吴氏白蛉为CC型,长管白蛉为DD型.利用PCR-RFLP方法可区分我国4种内脏利什曼病传播媒介的种类.
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分子生物学技术在寄生虫病防治研究中的应用
分子生物技术在寄生虫病诊断、分类以及流行病学调查方面得到广泛应用,本文就PCR、PCR-RFLP、RAPD等目前常用的分子技术作一综述,旨在为寄生虫病防治提供一定的参考价值.
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载脂蛋白基因型多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症相关性分析
目的 探讨载脂蛋白基因(ApoE)多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系.方法 应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测67例ICP孕妇与70例正常孕妇ApoE基因多态性,分析ApoE基因型和等位基因与ICP发病的关系.结果 对照组ε2、ε3、ε4等位基因频率分别为10.7%、82.9%、6.4%,ApoE3/3频率为68.6%,ICP组与对照组ApoE基因型和等位基因频率差异无统计意义(P＞0.05),ε4等位基因频率和ApoE3/4基因型频率在ICP组孕妇中偏高,但与对照组相比无统计意义(P＞0.05).结论 ApoE基因型和等位基因频率分布在ICP组和正常孕妇组存在平衡,ApoE基因可能与ICT无关联.
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用干血纸片扩增人雌激素受体基因
为解决外地特别是边远地区人群作分子生物学检测标本取样难的问题,建立了用干血纸片直接PCR扩增或将干血纸片中的血细胞洗脱裂解后进行PCR扩增雌激素受体(ER)基因的方法,结合已建立的RFLP分析、SSCP及DNA直接测序等方法,可对ER基因进行多态性、突变分析.干血纸片取样及保存容易,便于邮寄,适用于外地,特别是边远地区的样本采集,该法不仅能够简便易行的运用于雌激素和雌激素受体相关疾病患者的基因多态性和突变分析、家系调查和产前诊断,也适用于PCR基础上的其他各种基因的分析.
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广东省脑膜炎奈瑟氏菌porA基因限制性片段长度多态性分型研究
目的分析广东省在不同流行时期,特别是80年代后期以来脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)的特点.方法选择35株A、B、C群流脑菌株(1966～2000年)进行porA基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分型研究,采用PCR反应扩增porA基因,PCR产物纯化后经限制性内切酶Msp I酶切;10%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离酶切产物,银染显色.结果 35株被检菌株分为5种RFLP型,20株A群菌株(病人17株,带菌者3株)分3型,谱型与我国代表谱型相同(即a1、a2、a3型);11株B群菌株分5型,其中6株病人菌株每两株1型,分为3型(即b20、b21、 b21 a2型),其中b20型与a3型谱型相同;4株C群菌株有3株与b21 a2菌型相同.结论不同的血清群可有相同的RFLP谱型;A群Nm不同的流行周期有自己优势菌型,广东省60年代与80年代后期至今的代表菌型相同,为a3型;B群RFLP谱型比A群变异程度大,同一时期分离到的菌株可有几种不同的RFLP谱型;广东省流脑流行存在由A群向B群变迁的趋势.
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重庆地区汉族CD14启动子区多态性分析
目的调查CD14(-260)多态性在重庆地区汉族中的分布特征,及检验该随机样本遗传学研究的可靠性.方法对110名重庆汉族个体,采用降落式PCR和限制性片段长度多态性法(RFLP)进行基因型分析.结果重庆地区汉族CD14(-260)多态性TT、TC、CC 3种基因型频率分别为43.6%、39.1%和17.3%; 样本分布符合Hardy-Weinberg平衡.结论重庆汉族CD14(-260)多态性基因型分布特征与白种人存在明显差异.样本为H-W平衡群体,可进一步用于重庆汉族全身性炎症反应的关联分析.
