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利用B细胞培养和RT-PCR技术从我国HIV-1感染者中筛选膜蛋白特异性单克隆抗体的初步研究
本研究通过采集1型人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者抗凝全血,分离出外周血单个核细胞,然后用磁珠分选纯化记忆性B细胞和体外活化记忆性B细胞,促使其分泌抗体,用ELISA法识别阳性B细胞克隆,并提取阳性B细胞的RNA,从中扩增抗体重链和轻链基因并克隆到表达载体中,再用携带重链基因的质粒和携带轻链基因的质粒共转染293T细胞,获得HIV-1特异性人单克隆抗体,进行抗体特性的鉴定.结果从1例HIV-1感染者的记忆性B细胞中筛选出了4株HIV-1包膜糖蛋白(Envelope glycoprotein,Env)特异性人单克隆抗体,其中2株具有较好的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用活性,另有1株对HIV-1假病毒有较弱的中和活性.说明我们成功地引进了利用B细胞培养和RT-PCR技术从人体淋巴细胞中筛选特异性抗体基因的人单克隆抗体技术平台.用该技术可以成功获得HIV-1 Env特异性单克隆抗体,为将来从能产生高滴度广谱中和抗体的感染者体内筛选广谱中和抗体打下了基础.
关键词： 人类免疫缺陷病毒 单克隆抗体 中和活性 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用 -
Graves病治疗前后CD3-CD56+的变化及临床意义
目的 检测CD3-CD56+在Graves病治疗前后变化,探讨NK细胞在治疗过程中的变化及ADCC效应对Graves的影响或作用.方法 选取正常对照组22例,Graves病初次发现且未治疗病人33例,抗甲状腺药物(ATD)治疗后缓解患者30例,完全缓解患者12例,及复发患者11例,用流式细胞术检测CD3-CD56+的比值.结果 正常对照组结果为7.03±3.91,初发组结果为4.83±2.72,缓解组结果为5.12±3.19,完全缓解组结果为7.91±4.05,复发组结果为6.97±3.28；初发组及缓解组结果低于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.018,P=0.043),初发组结果明显高于完全缓解组,差异有统计学意义(P=0.007);缓解组结果低于完全缓解组,差异有统计学意义(P=0.016).结论 Graves病CD3-CD56+低于正常,ADCC效应及NK细胞的其他免疫功能有可能受到损害或限制,破坏体内的免疫平衡或免疫功能紊乱.CD3-CD56+结果对Graves各阶段病程的诊断、治疗及预后有临床意义.
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抗精子蛋白17单克隆抗体对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用
目的 观察抗精子蛋白17单克隆抗体(anti-Sperm protein 17 monoclonal antibody,anti-Sp17 mAb)对卵巢癌细胞系SKOV-3的体外抗肿瘤活性和机制.方法 采用MTT法观察抗anti-Sp17 mAb 对肿瘤细胞SKOV-3的细胞毒作用；以外周血单个核细胞PBMCs为效应细胞,SKOV-3为靶细胞,在效靶比分别为80∶1、40∶1和20∶1的条件下,观察anti-Sp17 mAb的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用；以SKOV-3为靶细胞,加入浓度为2.5％、5％、10％和20％的健康人新鲜血清作为补体,观察单抗的补体依赖性细胞毒性.结果 anti-Sp17 mAb对SKOV-3无明显细胞毒作用；与对照组相比,单抗对SKOV-3的ADCC作用呈剂量依赖关系,在效靶比为80∶1,孵育24 h后,细胞生长抑制率约为22％；补体的加入也可显著提高单抗对SKOV-3细胞生长的抑制率,在血清浓度为5％,单抗浓度为10 μg/ml时抑制率达到了40％.结论 anti-Sp17 mAb对表达Sp17蛋白的卵巢癌细胞株SKOV-3具有明显的ADCC和CDC效应.
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两种靶细胞在抗体依赖细胞介导的细胞毒活性检测中的比较
目的通过两种靶细胞在抗体依赖细胞介导的细胞毒(ADCC)活性检测的比较,选择一种较为合适的靶细胞.方法应用绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞(CRBC)作为靶细胞,在效靶比为1:10、抗SRBC抗体1:2000 、抗CRBC抗体1:200稀释,37℃孵育4h后,检测外周血单个核细胞PBMC)对两种靶细胞的细胞毒指数.结果检测得PBMC对SRBC的细胞毒指数(%)为9.03±6 .74,对CRBC的细胞毒指数(%)为31.77±16.27.其中对10例同人相同浓度PBMC对SRBC、C RBC的细胞毒指数配对比较中,经相关性检验,对两靶细胞的检测结果具有显著相关性(r= 0.7152,P<0.05);经t检验,对两靶细胞的细胞毒指数具有极显著性差异(t=4.33, P<0.01).结论在相同条件下,对CRBC的细胞毒指数比SRBC高 ,用CRBC作为靶细胞检测人PBMC的活性较好.
关键词： 人外周血单个核细胞 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用 比色法 靶细胞 -
FCGR 多态性对单克隆抗体抗肿瘤治疗的疗效预测价值
抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）是单克隆抗体如西妥昔单抗，利妥昔单抗，曲妥珠单抗发挥抗肿瘤作用的主要机制。FCG 受体（FCGR）主要在人白细胞上，在 ADCC 中发挥重要作用。单克隆抗体的疗效与 FCGR 多态性密切相关，其中 FCGR2A（H131R）和 FCGR3A（V158F）是主要的基因型。这篇文章对 FCGR 多态性对单克隆抗体在肿瘤患者中的疗效预测价值做一综述。
