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我国分离的XJ-90260病毒鉴定为西方马脑炎病毒
XJ-90260病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒,病毒的鉴定结果显示:XJ-90260病毒可引起BHK-21细胞病变,表现为圆缩,脱落;可引起Vero细胞病变,表现为圆缩,破碎,脱落;可以在C6/36细胞中增殖,但不引起细胞病变.对3日龄小白鼠2～3天致死,对3周龄小白鼠3～4天致死.该病毒株对酸、乙醚敏感,抵抗5-氟脱氧尿苷.病毒与甲病毒组特异性免疫腹水起反应,与乙型脑炎病毒及布尼亚病毒组特异性免疫腹水不反应.进一步的分子生物学鉴定表明,该毒株基因组3′非编码区(ntranslated region,UTR)核苷酸序列具有典型的西方马脑炎病毒特征,与标准西方马脑炎病毒(California株)的同源性为99%.结果证明:我国新疆分离的XJ-90260病毒为西方马脑炎病毒.这是我国有关西方马脑炎病毒的首次报导,有重要的流行病学意义.我国9省区,886份血清的流行病学调查显示,该病毒抗体阳性血清24份,阳性率为2.71%.其中新疆(8/157)、河南(6/76)、甘肃(5/94)三省区抗体阳性数较多,占总阳性数的79.2%(19/24).
关键词： XJ-90260病毒 病毒鉴定 西方马脑炎病毒 血清流行病学 -
西方马脑炎病毒抗体快速检测试纸条的研制
目的 研制一种快速检测西方马脑炎病毒(WEEV)抗体的试纸条.方法 利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条.对该试纸条的敏感性、特异性和稳定性做出评价,并拟合检测曲线进行半定量检测.在健康人血清、兔血清和鼠血清中添加WEEV抗体模拟污染样品,评价该方法的检测能力.结果 该试纸条可在20 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为120 ng/ml,模拟样品的检测灵敏度也相同.线性范围120～1200 ng/ml.对发病症状相似以及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应.试纸条在37℃下保存1个月,检测结果不变.结论 该试纸条具有快速、简便、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测.
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西方马脑炎的媒介、宿主及影响其传播的环境因素
西方马脑炎(WEE)是由西方马脑炎病毒(WEEV)引起,经蚊虫传播的人畜共患传染病.通常情况下,该病毒只在野鸟与蚊虫之间传播;环跗库蚊是WEE在北美地区的主要媒介;野鸟是其主要宿主.对蚊虫感染和传播WEEV具影响的因素是温度.此外,风向等因素都通过一定的方式影响着病毒的传播.
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我国分离的两株病毒为重组甲病毒
目的明确我国分离的XJ-90260和XJ-91006病毒的分类地位、种系发生和遗传型。方法 特异引物逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增两株病毒的NSP4、E1基因区和3′端非编码区，测序，进行核苷酸序列同源性比较和3′端非编码区核苷酸序列分析，并结合同属其他病毒这些基因区的核苷酸序列进行种系进化分析。结果 两株病毒的核苷酸序列同源性为100％，与西方马脑炎病毒的核种酸序列同源性高，具有西方马脑炎病毒3′端非编码区结构特征，其NSP4基因区与东方马脑炎病毒同源，E1基因区与辛德毕斯病毒同源，两株病毒均位于西方马脑炎病毒B组，与西方马脑炎病毒俄罗斯分离株进化关系近。结论 我国分离的XJ-90260和91006病毒属于西方马脑炎病毒同一遗传型，均为重组甲病毒。
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西方马脑炎病毒E2基因的克隆与原核表达
目的 克隆并原核表达西方马脑炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus,WEEV)E2基因.方法 采用PCR法从重组质粒pVL1393-C-E中扩增E2基因,插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-E2,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-E2经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为52 900,诱导6h目的蛋白的表达量较高,约占菌体总蛋白的23.5％,重组蛋白主要以包涵体形式存在,可与鼠源His单克隆抗体特异性结合.结论 克隆并原核表达了WEEV E2基因,为E2蛋白免疫原性及WEEV亚单位疫苗的研究奠定了基础.
