首页 > 文献资料
-
HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响
用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3.1 + /GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBM N-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS- GFP.采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal 和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系.分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞.收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平.收集L ZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Wes tern blot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Nort hern blot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录水平.重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1 细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能.PCR扩增H HV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3 载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒.此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性 .结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染效率达56 %;②重组LZRS-Tat101病毒能够在其感染的BCBL-1细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能;③Tat蛋白不能有效上调 HHV-8 Rta启动子活性;④细胞内HIV-1 Tat蛋白诱导HH V-8可溶性周期复制的能力较弱.提示,单纯HIV-1 Tat蛋白并不能激活潜伏感染的HHV-8.
-
新疆维吾尔族及哈萨克族经典型卡波氏肉瘤患者多种样本中人类疱疹病毒8型的初步研究
目的 探讨新疆经典型卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)患者多种样本中人类疱疹病毒8型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)的病毒感染情况.方法 对8例新疆地区经典型的Kaposi肉瘤患者冰冻肉瘤、血液、尿液、唾液标本进行基因组DNA抽提,PCR法扩增HHV-8 ORF26基因片段.结果 HHV-8 ORF26基因检测情况和8例新疆经典型Kaposi肉瘤组织、血液、尿液和唾液中均有HHV-8感染.结论 HHV-8感染是新疆经典型KS发病的主导因素,HHV-8感染可能与KS患者多器官损害的疾病.
关键词： 人类疱疹病毒8型(HHV-8) 普通PCR 经典型卡波氏肉瘤
