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云南锦鲤养殖场鲤浮肿病毒的鉴定及基因型分析
锦鲤睡眠病(Koi sleepy disease,KSD)是一种由鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)引起鲤科鱼类死亡的病毒性传染病,已经对世界鲤科鱼类养殖业造成危害.2016年,中国云南某锦鲤养殖场养殖的锦鲤出现以体表出血、眼睛凹陷、沉于池底昏睡为主要临床症状的疾病,发病水温为11℃～20℃,累计死亡率30％～50％.从该养殖场不同池塘采集两个样品,使用nested PCR和real-time PCR方法进行实验室诊断.结果表明,两个样品CEV检测结果均为阳性,发病锦鲤鳃和肾脏CEV病毒载量为250.02～1 332.94拷贝/250 ng,鳃中CEV病毒载量约为肾脏的6～7倍.在排除寄生虫、细菌、SVCV和KHV感染后,推测CEV可能是引起此次云南锦鲤场发生疫情的病原,但还需回归感染实验做进一步验证.基于CEV P4a基因的遗传进化分析结果表明,此次从云南发病锦鲤检出的两个CEV毒株均属于Ⅱa基因型,且与英国(R083株)和日本CEV毒株(CyPP-3)的遗传进化关系近.
关键词： 锦鲤睡眠病(KSD) 鲤浮肿病毒(CEV) 云南 基因型 -
鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立
为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,CEFAS)设计合成的引物序列进行优化,合成1对特异性引物和1条用FAM荧光基团标记的TaqMan探针;根据KHV ORF7基因保守序列,设计筛选1对特异性引物和1条用VIC荧光基团标记的Taq-Man探针.优化反应条件,建立了CEV和KHV双重实时荧光定量PCR检测方法.结果显示该方法特异性强,与其它水生动物病毒无交叉反应;灵敏度高,对CEV和KHV的检测限均为15拷贝数/μL;组内重复与组间重复的平均变异系数小于3％.本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可用于CEV和KHV的快速检测.
